毛蚶抗癌蛋白对人乳腺癌细胞MCF7的生长抑制作用研究

摘要

目的：分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,以人乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,研究细胞毒作用.rn 方法：以新鲜毛蚶软体部分为原材料,经低温水提、硫酸铵分级沉淀获得毛蚶蛋白活性组分Ⅲ;进一步利用FPLC系统结合阴离子交换层析及凝胶柱层析法对其进行分离,获取毛蚶抗癌蛋白组分,命名NS;以人乳腺癌细胞MCF7为研究对象,倒置相差显微镜观察NS组分对癌细胞生长的影响,Giemsa染色观察NS组分对癌细胞及核形态的影响,流式细胞术测定NS组分作用MCF7细胞后对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot检测与细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.rn 结果：NS组分对人乳腺癌细胞MCF7生长具有一定的抑制作用;倒置相差显微镜下,NS组分作用MCF7细胞12h,部分细胞收缩变圆、脱落,24h、48h后细胞脱落现象更加明显;Giemsa染色发现,NS组分处理12h后细胞出现有丝分裂相增加,继而出现多核或核碎裂等现象;流式细胞术检测NS组分对MCF7细胞周期的影响,发现其主要引起细胞G2-M期阻滞;AnnexinV-PI双染结合流式细胞术检测NS组分对MCF7细胞凋亡的影响,发现随着药物作用时间的延长,细胞凋亡比例逐渐增大.Western blot检测发现NS组分作用MCF7细胞后p53及procaspase-3蛋白表达量均上调.rn 结论：毛蚶抗癌蛋白NS组分体外对人乳腺癌细胞MCF7的细胞毒作用主要通过引起细胞发生G2-M期阻滞、诱导细胞凋亡实现的,期间伴随p53及procaspase-3蛋白表达上调.