MMP-8及MMP-9对角膜混浊度的影响

摘要

目的：
　　探讨MMP-8、MMP-9对角膜混浊度的影响；比较MMP-8及MMP-9对角膜基质胶原的破坏作用。
　　方法：
　　选取角膜正常的C57BL/6J小鼠8只，共16只角膜，经腹腔麻醉后脱颈椎法处死，2 mm角膜环钻取中央角膜，用于体外实验。将角膜随机分4组，MMP-8组、MMP-9组为实验组，Assay Buffer组为阴性对照组，生理盐水组为空白对照组，分别加入到含100μL的20 ng/μL MMP-8、20 ng/μL MMP-9、Assay Buffer、生理盐水的96孔板中，36.5℃孵育24 h后取出，测定各个角膜的羟脯氨酸浓度；选取角膜正常的C57BL/6J小鼠30只，共60只角膜，用于体内实验。将小鼠分3组，MMP-8组、MMP-9组为实验组，生理盐水组为对照组，分别给予角膜基质内注射约10μL的20 ng/μL MMP-8、20 ng/μL MMP-9及生理盐水，分别于注射前（0 h）及注射后4、8、12、20、24 h进行混浊度评分、二次谐波扫描角膜基质信号强度，并于8 h、24 h分别经腹腔麻醉后脱颈椎法处死，取角膜进行羟脯氨酸浓度测定。
　　结果：
　　体外实验中，实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于阴性对照组（F=451.492， P=0.000）及空白对照组（F=252.403，P=0.000），差异有统计学意义，MMP-8组角膜羟脯氨酸浓度明显低于MMP-9组（F=55.184，P=0.002），差异有统计学意义。体内实验中，0 h实验组与对照组角膜混浊度无明显差异（χ2=0.000， P=1.000）。4、8、12、20、24 h实验组角膜较对照组角膜明显混浊，结果有统计学差异（P<0.05），MMP-8组较MMP-9组角膜混浊度无明显差异（P>0.05）。0 h二次谐波扫描实验组与对照组角膜基质信号强度无明显差异（P>0.05）。4、8、12、20、24 h，实验组角膜基质信号强度均明显低于对照组，结果有统计学差异（P<0.05），MMP-8组与MMP-9组相比较，结果无明显统计学差异（P>0.05）。8 h对小鼠角膜取材进行羟脯氨酸浓度测定，实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于对照组，差异有统计学意义（F=17.877，P<0.001），MMP-8组与MMP-9组相比较，结果无明显统计学差异（P>0.05）。24 h对小鼠角膜取材进行羟脯氨酸浓度测定，实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于对照组，差异有统计学意义（F=41.400，P<0.001），MMP-8组与MMP-9组相比较，结果无明显统计学差异（P>0.05）。MMP-8组SHG角膜基质信号强度与角膜混浊度临床评分之间呈明显负相关（rs=-0.511，P<0.001），MMP-9组SHG角膜基质信号强度与角膜混浊度临床评分之间呈明显负相关（rs=-0.613，P<0.001）。
　　结论：
　　MMP-8及MMP-9可降解角膜基质中的胶原纤维，导致角膜基质胶原纤维排列紊乱，角膜混浊度升高；体外实验中，同一质量浓度的MMP-9较MMP-8有更强的降解角膜基质胶原的能力；在体实验中，角膜基质注射条件下，同一质量浓度MMP-9与MMP-8降解胶原的能力无明显差异。

目录

声明

引言

1 材料

1.1 实验动物

1.2 实验仪器

1.3 实验试剂

2 方法

2.1 试剂配制

2.2 酶活性鉴定

2.3 体外实验

2.4 体内实验

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 rmMMP-8及rmMMP-9活性鉴定

3.2 体外实验结果

3.3体内实验结果

4 讨论

5 结论

参考文献

综述:真菌性角膜炎的基质破坏及瘢痕形成机制研究进展

前言

1 FK的发生机制

2 FK病理过程中主要的免疫细胞和炎症因子

3 FK中角膜基质损伤

4 瘢痕修复机制

5 小结

参考文献

附录

个人简历

致谢