ALA-PDT对尖锐湿疣组织VEGF和CD34表达的影响

摘要

背景和目的
　　尖锐湿疣(condyloma acuminatum, CA)是由人乳头瘤状病毒（ human papilloma virus，HPV）感染引起的发生于皮肤黏膜的良性赘生物，为我国常见的性传播疾病之一，其病理表现为表皮角质形成细胞过度增殖，真皮淋巴细胞浸润、毛细血管增生及血管扩张，凹空细胞是其特征性表现，分布在颗粒层及棘层。传统治疗方法主要为冷冻、激光、手术或外用药物，对于疣体有效，但其创伤性大且对亚临床感染基本无效，治疗后易复发。
　　ALA-PDT（5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法，5-aminolevulinic acid photodynamic therapy,ALA-PDT)是近年广泛应用于尖锐湿疣及肿瘤等的治疗方法，治疗CA具有副作用小、复发率低等优点。其基本原理为光敏剂特异性地在代谢旺盛的组织中累积，在特定波长的光照下，产生单线态氧及氧化物，其可产生细胞毒性作用而杀伤病变组织，但对周围正常组织无损伤。但ALA-PDT杀伤病变组织细胞的机制尚不是很清楚，可能与促进细胞凋亡、抑制增殖、损伤组织血管、调节局部免疫力等相关，目前尚缺乏ALA-PDT对CA组织血管生成影响的研究。本实验通过研究ALA-PDT治疗CA前后，疣体组织VEGF和CD34的表达变化，探讨ALA-PDT对CA组织血管生成的影响，进一步丰富ALA-PDT杀伤CA组织的理论机制。
　　材料与方法
　　1.材料
　　54例CA患者，均来自郑州大学第一附属医院皮肤科门诊，其中女23例，男31例，年龄18～60岁，平均年龄为34.15岁；患病病程为19天～165天，平均为52.36天；所有入选患者均符合尖锐湿疣的实验室、临床及病理诊断标准，患者临床表现典型，病理诊断明确。所有患者均为初次确诊，且在此次就诊前均未接受任何治疗，对于患有其他系统性疾病患者均排除在外。
　　2.方法
　　对于符合实验标准的54例患者，于治疗前取其疣体组织设为对照组，对所有患者进行ALA-PDT治疗，治疗后1周复诊，取其治疗后组织作为实验组。利用免疫组织化SP法，对实验组和对照组CA组织中VEGF蛋白以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况进行检测。
　　结果判定标准：VEGF的判断标准： VEGF蛋白的阳性显色是浅黄至棕褐色颗粒，主要是胞质着色。在光镜下，阳性细胞率的计算是随机抽取每张切片的5个不同高倍视野，然后取其平均值，要求在400倍镜下，连着计数200个细胞。阳性细胞所占总细胞百分比：0分是0～10％、1分是11％～25％、26％～50％对应2分、3分是51％～75％、4分对应76～100％。着色强度：0分是不着色、1分是浅黄色、2分为棕黄色、3分是棕褐色；将其二者评分相乘，得出总分。总分数为0分、1～4分、6～8分、9～12分分别对应为阴性（?）、弱阳性（+）、阳性（++）、强阳性（+++）。微血管密度计数（microvessel density， MVD）:CD34阳性的细胞是血管内皮细胞胞核或胞浆着色为淡至棕褐色或黄色的颗粒。先将高血管密度区在（40x）低倍镜下找出，然后于（200x）高倍镜下，找出着色的微小血管及毛细血管并进行计数。计数5个高倍视野的血管数，最后结果用其平均数来表示。
　　3.统计学处理
　　对所得数据应用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，用χ2检验统计ALA-PDT治疗前和治疗后VEGF阳性表达率差异；治疗前后阳性表达强度差异采用秩和检验；采用t检验统计ALT-PDT治疗前和治疗后两组间MVD差异；检验水准采用P＜0.05表示差异具有统计学意义。
　　结果
　　1.ALT-PDT治疗前和治疗后CA组织中VEGF的表达
　　VEGF蛋白的阳性显色是浅黄至棕褐色颗粒，主要是胞质着色。54例 CA患者 ALA-PDT治疗前疣体中 VEGF的阳性表达例数为45例，阳性表达率为83.33%（45/54），ALA-PDT治疗后阳性表达例数为24例，阳性表达率为44.44%（24/54），治疗前后的阳性表达率比较，其差异具有统计学意义（χ2=17.69, P<0.001）。ALA-PDT治疗前疣体中VEGF阳性表达强度多在++～+++，治疗后表达强度多在-～++，治疗前后的表达强度比较，其差异具有统计学意义（Z=-5.25， P<0.001）。
　　2.ALT-PDT治疗前和治疗后疣体组织中MVD的变化
　　CD34阳性的细胞是血管内皮细胞胞核或胞浆着色为淡至棕褐色或黄色的颗粒。ALA-PDT治疗前血管内皮细胞CD34表达强度多在++～+++，MVD平均为(36.20土8.80)%；ALA-PDT治疗后血管内皮细胞CD34表达强度多在+～++， MVD平均为(11.83土1.71)%，比较治疗前后两组MVD，其差异具有统计学意义(t=19.95，P<0.001)。
　　结论
　　1.CA组织在经ALA-PDT治疗后，其VEGF阳性表达率、表达强度均下降，表明ALA-PDT可通过抑制组织中的促血管内皮细胞生成因子表达，进而抑制疣体的增生。
　　2.CA组织在经ALA-PDT治疗后，其用血管特异性标记物CD34测量的MVD值明显下降，表明ALA-PDT通过减少组织中的微血管密度，从而抑制疣体增生。
　　3.抑制血管内皮细胞的增殖及损伤组织中的新生血管是ALA-PDT治疗CA的机制之一。

目录

声明

缩略词表

1 前言

2 材料与方法

2.1 临床资料

2.1.1 标本来源

2.1.2 临床病例资料

2.1.3 尖锐湿疣临床和组织学诊断标准

2.2 主要仪器、试剂

2.2.1 主要试剂及其来源

2.2.2主要仪器设备

2.2.3 主要试剂配制

2.3 试验方法

2.3.1 ALA-PDT疗法

2.3.2 组织切片制备

2.3.3 苏木精-伊红(HE)染色的实验步骤

2.3.4 免疫组化法

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 ALT-PDT治疗前和治疗后CA组织中VEGF的表达

3.2 ALT-PDT治疗前和治疗后CA组织中MVD的变化

4 讨论

5 结论

参考文献

附图

综述:尖锐湿疣治疗及复发危险因素的研究进展

个人简历、在读期间发表的论文

致谢