Aurora家族基因在急性白血病中的表达及其临床意义

摘要

Aurora家族基因包括Aurora-A、B、C，它们表达的蛋白是一组高度相关的Aurora激酶家族，在正常细胞中对调控细胞分裂起着至关重要的作用，Aurora-A激酶的主要功能是中心体的调节和有丝分裂纺锤体的形成，Aurora-B激酶是一种旅客蛋白，其功能主要是确保染色体的分离和胞质分裂，Aurora-C激酶主要在减数分裂中起重要作用，也有研究显示Aurora-C激酶也是一种旅客蛋白，对Aurora-B激酶的功能起补充作用，Aurora激酶的失调或异常会引起细胞分裂异常，进而促使染色体不稳定和肿瘤的形成。从目前研究来看，Aurora-C激酶主要参与生精过程，对有丝分裂特别是对中心体的功能我们了解的还不够深入，尤其是其对肿瘤发生、发展、耐药的机制及意义，有研究认为其对肿瘤不起作用，有研究认为其促进Aurora-B激酶的功能，有研究认为Aurora-C激酶也能促进细胞转化和肿瘤形成。在多种肿瘤中Aurora-A和B激酶高表达，其表达异常能够激活调节细胞增殖的相关信号传导通路，阻碍细胞分化与凋亡，其表达水平和肿瘤的分期、预后等都有一定的相关性，然而，Aurora基因与急性白血病(AL)临床指标的关系鲜有研究，所以Aurora-A、B、C mRNA表达水平与急性白血病类型、初治白血病细胞(WBC)水平、乳酸脱氢酶(LDH)水平、危险分层及预后不良表面抗原（CD34、CD56、CD71）等临床指标的关系将在本实验中要进一步研究。
　　研究目的
　　本研究中初步采用荧光定量PCR对初诊和化疗完全缓解的AL病人与健康志愿者骨髓单个核细胞中AUR-A、B、C mRNA表达水平进行检测，并探讨其与AL临床指标的关系及3基因表达水平之间的相关性。
　　材料与方法
　　收集2016年5月至9月至郑州大学第一附属医院血液科住院并考虑AL患者和已明确诊断为 AL来院强化治疗患者以及健康志愿者的骨髓标本2ml,每个标本进行编号，搜集患者姓名、住院号、标本日期与编号相对应。应用淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞，应用Trizol提取骨髓单个核细胞总RNA，琼脂糖电泳鉴定RNA完整性，紫外分光光度计检测RNA纯度和浓度，舍弃RNA质量不合格（RNA不完整，不纯或者浓度过低）的标本,质量合格标本加入 RNA酶抑制剂并应用无RNA酶水调整RNA浓度至400ng/μL，然后暂时存放到-80℃冰箱保存。
　　初诊未明确诊断患者明确诊断后剔除非急性白血病标本，收集剩余标本的临床资料如性别、年龄、急性白血病分型（急性髓系白血病M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7，急性T或B淋巴细胞白血病）、初诊WBC计数、幼稚细胞比例、初诊LDH水平、染色体类型(正常核型、t(15;17)、t（8；21）、t(9;22)、复杂核型、其它)、危险分层（低危、中危、高危）、化疗缓解情况（1疗程缓解与否）、基因突变情况和与预后相关的细胞CD分子阳性百分比（CD34、CD56、CD71），剔除临床资料不完整的标本，符合条件的标本应用荧光定量PCR检测Aurora-A、B、C mRNA相对表达量，其等于2-ΔCT，其中ΔCT=目的基因CT-内参基因CT，内参基因选用GAPDH。
　　应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析，对2组间表达差异采用非参数检验2个独立样本检验，对于多组间表达差异采用非参数检验k个独立样本检验，组间差异有统计学意义者采用Bonferroni法进行多重比较，P<0.05表示差异有统计学意义，对于定量资料的相关性分析采用Spearman相关性分析。
　　结果
　　1 Aurora家族基因在不同分组中的表达差异
　　Aurora-A、B、C基因mRNA表达水平在73例初诊AL患者均高于14名健康志愿者和20例化疗完全缓解AL患者（P<0.01），而3种基因mRNA表达水平在健康组和缓解组差异均无统计学意义（P>0.05），在急性淋巴细胞白血病(ALL)组均高于急性髓系白血病(AML)组（P<0.01）。
　　Aurora-A、B、C基因mRNA表达在CD34、CD71、CD56阴性与阳性组差异无统计学意义（P>0.05），3种基因表达在不同性别组和1疗程化疗缓解与未缓解组差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　Aurora-A、B、C表达在不同染色体分组中差异无统计学意义（P>0.05）。AUR-A、B、C mRNA表达在高危组均高于低危组（P<0.05），在中危组和低危组与高危组和中危组Aurora-A、B、C表达差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　2 Aurora家族基因与临床指标的相关性
　　73例初诊AL患者中，Aurora-A mRNA表达水平与初诊LDH水平和危险分层呈显著正相关（r=0.279，P=0.017；r=0.314，P=0.007）；Aurora-B与初诊LDH水平和危险分层呈显著正相关（r=0.277，P=0.018;r=0.349,P=0.002）， Aurora-A、B均与年龄、初诊WBC水平、初诊骨髓幼稚细胞比例和1疗程是否缓解无显著相关性;Aurora-C表达水平与初诊WBC水平、初诊LDH水平和危险分层呈显著正相关（r=0.263，P=0.025;r=0.348, P=0.003;r=0.376,P=0.001），与年龄在0.05水平显著负相关（r=-0.241, P=0.040），而与初诊骨髓中幼稚细胞比例和1疗程是否缓解无显著相关性。
　　3 Aurora家族基因之间表达水平的相关性
　　Aurora-A和B（r=0.444,P=0.000）、Aurora-B和C（r=0.763,P=0.000）、Aurora-A和C（r=0.616,P=0.000）mRNA表达水平均呈显著正相关。
　　结论
　　1．Aurora-A、B、C mRNA在初诊AL中相对于健康人和化疗缓解患者高表达,且在ALL中高于AML，在T-ALL高于B-ALL，提示，Aurora家族基因可能均参与了AL的发生发展，并可以作为AL预后的标志物。
　　2．Aurora-A、B、C mRNA表达水平与初诊WBC水平、LDH水平和危险分层显著正相关，提示Aurora家族基因均可以作为危险分层或预后的指标。
　　3．Aurora-A、B、C mRNA表达水平在AL中显著正相关，提示3基因在AL的发生、发展过程中可能存在功能互补或重叠。

目录

声明

主要英文缩略词表

引言

材料与方法

1 材料

1.1 研究对象

1.2 剔除标准

1.3 一般资料

1.4 治疗方案

1.5 实验试剂

1.6 实验器材

2 实验方法

2.1 骨髓单个核细胞分离

2.2 总RNA的提取

2.3 RNA浓度、纯度检测

2.4 RNA完整性的检测

2.5 反转录

2.6 荧光定量PCR

2.7 统计学分析

结果

1 Aurora家族基因在不同分组中的表达差异

2 Aurora家族基因与临床指标的相关性

讨论

结论

参考文献

综述:Aurora家族基因的研究进展

个人简历及在校期间发表论文

致谢