采用PCR-DGGE方法测定枸杞多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用

摘要

目的：
　　使用分子生物学的PCR-DGGE法分离肠道细菌16SRNA V3可变区的PCR产物，经DGGE图谱条带分析，结合传统的微生物分离、培养、鉴定方法，探讨枸杞多糖对肠道微生态失调模型小鼠的调节作用。
　　方法：
　　首先采用给小鼠灌胃盐酸林可霉素的方式，制作出小鼠肠道微生态失调模型。随后将模型小鼠分为丽珠肠乐组、自然恢复组和枸杞多糖组，分别给予相应药物治疗。灌胃七天后，处死所有小鼠，采集回盲部粪便标本。梯度稀释粪便标本，而后采用传统的活菌培养和提取总DNA以及PCR-DGGE方法检测小鼠肠道菌群DNA。最后将所有数据收集分析，观察枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠的治疗效果。
　　结果：
　　传统活菌培养结果显示：小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌升高，肠杆菌、肠球菌下降，枸杞多糖组和丽珠肠乐组与自然恢复组比较，差异非常有显著性（P<0.01）。枸杞多糖组与丽珠肠乐组相比，差异有显著性（P<0.05）。PCR-DGGE结果显示：粪便样本提取总DNA浓度测定值方面，枸杞多糖组和丽珠肠乐组高于自然恢复组（P<0.05），DGGE的多样性指数分析结果为，丽珠肠乐组和枸杞多糖组大于自然恢复组和正常对照组，差异有显著性（P<0.05）；枸杞多糖组稍优于丽珠肠乐组，但统计学无明显差异。
　　结论：
　　给小鼠灌胃盐酸林可霉素可以成功制造小鼠肠道微生态失调模型。传统活菌培养和PCR-DGGE的结果均证明，枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠具有显著的调整作用。PCR-DGGE技术因具有全面性、灵敏度高、节省时间、无需微生物培养等优点，较传统培养法具有显著的优势。PCR-DGGE技术是诊断微生态失调、评价微生态调节剂作用的有力工具。

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