黄芪提取物对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用

摘要

目的：研究黄芪多糖(APS)和黄芪甲苷(Astr)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中，对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(Trx)表达的影响，分析 APS和Astr在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。
　　方法：将培养的MRC-5细胞随机分组：空白对照组、不同浓度 H2O2组、Astr和APS处理组。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型，使用MTT法检测H2O2对 MRC-5细胞的增殖抑制率，待 H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后，用最佳H2O2浓度与不同浓度的APS、Astr共同作用于MRC-5细胞，确定APS、Astr对氧化损伤MRC-5细胞的最佳作用浓度；MRC-5细胞DNA氧化损伤情况则采用免疫荧光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)含量；应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡；采用反转录 PCR分析 Trx和APE/Ref-1 mRNA的表达；Western blot法检测 Trx和APE/Ref-1蛋白水平的变化。
　　结果：实验表明，经过氧化氢孵育24h的MRC-5细胞，可诱发细胞损伤，细胞存活力以剂量依赖性方式降低。800μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型。与H2O2引起氧化损伤的模型组相比，细胞经Astr和APS与H2O2共孵育后，明显抑制H2O2引起的APE/Ref-1、Trx蛋白表达下调,降低8-OHdG含量，抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。
　　结论：H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤，Astr和APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和Trx的表达，Astr和APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡。黄芪提取物通过上调APE/Ref-1和Trx的基因表达水平拮抗H2O2而对 MRC-5的氧化损伤具有保护作用。

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中文摘要

英文摘要

前言

文献综述

一、APE/Ref-1的概述

二、硫氧还蛋白的概述

三、黄芪概述

材料与方法

一. 材料

二、实验方法

实验结果

一、H2O2诱导的MRC-5细胞增殖抑制情况

二、黄芪甲苷和黄芪多糖对MRC-5细胞的存活率影响作用

三、Astr和APS 对H2O2诱导的MRC-5细胞早期凋亡情况

四、Astr和APS 对H2O2诱导的MRC-5细胞氧化损伤影响

四、Astr和APS对MRC-5细胞模型APE/Ref-1和Trx mRNA表达情况

六、Astr和APS对MRC-5细胞模型APE/Ref-1和Trx蛋白表达情况

讨论

结论

参考文献

致谢

英文缩写

攻读学位期间发表的学术论文