外源性孕酮和人绒毛膜促性腺激素对小鼠子宫巨噬细胞的影响

摘要

目的：通过研究外源性孕酮、人绒毛膜促性腺激素(hCG)这两种生殖激素对正常非孕小鼠和妊早期(D4、D5、D6、D7)小鼠子宫巨噬细胞的影响，以探讨二者与母胎免疫耐受之间的关系及其免疫抑制作用。 方法：(1)正常非孕小鼠随机分为对照组P-D和三个实验组P-SD、P-SZ、P-SG，实验组分别皮下注射0.4mg、2mg、4mg的孕酮，对照组用等体积芝麻油处理，连续注射五天。(2)取动情雌鼠与雄鼠1：1合笼过夜，次日清晨检出阴栓者作为实验动物并定为孕0d，分别于孕4d、5d、6d、7d将小鼠随机分为对照组和实验组，分别标记为：P-D(4/5/6/7)-D和P-D(4/5/6/7)-S。实验组皮下注射4mg的孕酮，对照组用等体积芝麻油处理。(3)正常非孕小鼠随机分为对照组h-D和三个实验组h-SD、h-SZ、h-SG，实验组分别腹腔注射1IU、5IU、25IU的hCG，对照组用等体积生理盐水处理，连续注射五天。(4)取动情雌鼠与雄鼠1：1合笼过夜，次日清晨检出阴栓者作为实验动物并定为孕0d，分别于孕4d、5d、6d、7d将小鼠随机分为对照组和实验组，分别标记为：h-D(4/5/6/7)-D和h-D(4/5/6/7)-S。实验组腹腔注射1IU的hCG，对照组用等体积生理盐水处理。以上实验均于末次注射后6小时取子宫，冰冻切片，通过非特异性酯酶(a-NAE)染色和免疫组化(CD14、CD204)检测子宫巨噬细胞的变化。 结果：(1)与对照组P-D相比，实验组P-SD、P-SZ、P-SG的小鼠子宫内膜、肌层、外膜上的a-NAE+和CD14+巨噬细胞数量均极显著性减少(P<0.01)，其效应与浓度呈正相关。未检测到CD204+巨噬细胞。(2)妊娠4d：与对照组P-D4-D相比，实验组P-D4-S小鼠子宫环肌外层和环肌内层及功能层的a-NAE+、CD14+和CD204+巨噬细胞均显著增多(P<0.01)；妊娠5d：与对照组P-D5-D相比，实验组P-D5-S小鼠子宫环肌外层和环肌内层的a-NAE+、CD14+和CD204+巨噬细胞均显著增多(P<0.01)，功能层a-NAE+和CD14+巨噬细胞无显著变化，但CD204+巨噬细胞显著增多(P<0.01)；妊娠6d和7d：与对照组相比，实验组小鼠子宫a-NAE+、CD14-和CD204+巨噬细胞均无显著变化。(3)与对照组h-D相比，低浓度组和高浓度组子宫三个部位的a-NAE+和CD14-巨噬细胞均极显著减少(P<0.01)：中浓度组的肌层和外膜a-NAE+和CD14+巨噬细胞也极显著减少(P<0.01)，内膜a-NAE+和CD14+巨噬细胞却比对照组显著增加(P<0.01)。其中低浓度组子宫绝对数目和相对数目都最少。未检测到CD204+巨噬细胞。(4)妊娠4d、5d、6d：与对照组相比，实验组小鼠子宫环肌外层和环肌内层的a-NAE+、CD14+和CD204+巨噬细胞均显著减少(P<0.01)，功能层细胞无显著变化；妊娠7d：与对照组h-D7-D相比，实验组h-D7-S小鼠子宫巨噬细胞三个部位的a-NAE+、CD14+和CD204+巨噬细胞均无显著变化。 结论：(1)外源性孕酮可以抑制正常非孕小鼠子宫巨噬细胞向内膜的迁移和活化，其效应在一定范围内与剂量呈正相关。高剂量的外源性孕酮在妊娠不同时期不发挥效应或促进子宫巨噬细胞的活化，这可能与妊娠期子宫内高水平的孕酮环境有关。(2)外源性人绒毛膜促性腺激素可以抑制正常非孕小鼠子宫巨噬细胞向内膜的迁移和活化，其作用效应与剂量不呈直线关系，可能是通过性激素这一途径实现的。低剂量的人绒毛膜促性腺激素在妊早期一定程度上可抑制巨噬细胞向内膜迁移，但效应不及其处理于非孕小鼠，这也可能与妊娠期子宫内生殖激素的高表达状态有关。(3)在正常非孕小鼠子宫内未检测到清道夫受体，而孕鼠子宫内可检测到，推测妊娠期小鼠子宫部分巨噬细胞为替代性活化途径活化的巨噬细胞，并介导了妊娠期免疫耐受环境的维持。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

文献综述

1.1巨噬细胞

1.1.1巨噬细胞的形态与结构

1.1.2巨噬细胞的受体、酶系及活性产物

1.1.3巨噬细胞的生理功能

1.1.4巨噬细胞与妊娠

1.2孕酮

1.2.1孕酮与胚胎着床

1.2.2孕酮与早孕维持

1.2.3孕酮与流产

1.3人绒毛膜促性腺激素

1.3.1 hCG的生物功能

1.3.2 hCG的临床应用

1.3.3 hCG与妊娠结局

1.4本研究的目的和意义

前言

材料与方法

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2药品与试剂

2.1.3主要仪器

2.2方法

2.2.1样品制备方法

2.2.2实验方法

2.2.3细胞统计

结果与分析

3.1孕酮对小鼠子宫巨噬细胞的影响

3.1.1孕酮对非孕小鼠子宫巨噬细胞的影响

3.1.2孕酮对孕鼠子宫巨噬细胞的影响

3.2人绒毛膜促性腺素对小鼠子宫巨噬细胞的影响

3.2.1 hCG对非孕小鼠子宫巨噬细胞的影响

3.2.2 hCG对孕鼠子宫巨噬细胞的影响

讨论

4.1 本研究的出发点

4.2孕酮、hCG对小鼠子宫巨噬细胞的影响

4.2.1 孕酮对小鼠子宫巨噬细胞的影响

4.2.2人绒毛膜促性腺激素对小鼠子宫巨噬细胞的影响

4.3对孕酮、人绒毛膜促性腺激素免疫抑制作用的临床展望

结论

参考文献

图版1

图版2

致谢

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