胎儿生长受限与胎盘细胞凋亡相关性研究

摘要

目的：细胞凋亡亦称程序性细胞死亡，是多细胞生物体正常的生理死亡过程，用以清除不需要的或对自身有害的细胞，但若凋亡过度或不足，均可导致疾病。近年来，对细胞凋亡的研究多集中于肿瘤方面，而对胎盘细胞的研究较少。胎盘是母儿间进行物质交换的重要器官，它具有几乎所有人体器官功能的作用，包括气体交换、营养物质供应、排除胎儿代谢产物、合成防御等功能，使胎儿宫内生长发育处最佳环境。因此，凡影响胎盘发育的因素，均可影响胎儿发育。通过电镜观察，胎儿生长受限、早产、妊高征等，其病理生理变化均为螺旋小动脉末端在进入绒毛间隙前，有血管硬化和纤维沉着及血栓形成，造成血管部分或完全堵塞，致使子宫-胎盘间血循环不足。Allaire等通过对31例先兆子痫(重度妊高征)病例和31例正常妊娠病例比照分析得出结论：先兆子痫组比对照组胎盘细胞凋亡显著增多。因此推论，胎儿生长受限组胎盘细胞凋亡亦较对照组多。我们随机选择唐山地区23例胎儿生长受限病例与对照组进行比照分析，旨在探讨胎儿生长受限与胎盘细胞凋亡的相关性。 方法：1标本的提取：选择符合条件的胎儿生长受限病例的胎盘及正常妊娠妇女的胎盘，待其自然娩出后，用生理盐水洗净血液-固定-取石蜡包埋备用。 2TUNEL法检测细胞凋亡：TUNEL法即脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法，实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养细胞和从组织中分离的细胞凋亡测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛应用。 2.1取石蜡包埋组织，切取5微毫米切片，贴附于硅化玻片60℃烤干备用。 2.2主要试剂：原位细胞凋亡检测试剂盒[Kit，AP]系德国BOEHRINGERMANNHEIM公司产品，参照试剂盒设立对照组。蛋白酶K系Sigma公司产品。BCIP/NBT底物液系DAKO公司产品。 2.3TUNEL法标记凋亡细胞：石蜡包埋组织切片常规脱蜡至水，20mg/L蛋白酶K于37度消化20min，PBS洗涤3次，参照试剂盒加50uLTUNEL反应液，于37度孵育60minPBS洗涤3次，加50uL转换-AP液，于37度孵育30min，PBS洗涤3次，加50uLNBT/BCIP底物液，于室温下显色8min，PBS洗去底物液，常规封片，备镜检。 2.4镜检：高倍镜下于标本，观察3-10个不同视野，共观察200-600个细胞核，计数TUNEL染色阳性，即细胞核染成深兰色或紫黑色的细胞数和细胞总数，计算其平均细胞调亡率。在HE切片上，凋亡一般累及单个或小堆细胞。单个凋亡的细胞与周围细胞分离，细胞皱缩呈圆形或卵圆形。核染色质浓集成深兰色或紫黑色致密的球状，或染色质重新分布于核膜下呈圆形或呈新月形。 3.用电镜进一步检测细胞凋亡：凋亡细胞染色质固缩，常聚集于核膜呈境界分明块状或新月型小体，细胞浆浓缩或裂解成质膜包绕的碎片。单纯或继发性坏死细胞也可出现核固缩，但染色质分布无规律，边界不清。 4.数据处理：采用SPSS8.0ForWindows软件包进行统计分析。采用t检验比较FGR组与对照组的胎盘细胞平均凋亡率间有无差异，而两组间孕产妇年龄、孕龄、体重等有无差异采用方差分析进行检测。 结果：光镜下凋亡细胞核被染成深兰色或紫黑色，进一步电镜观察，可见凋亡的典型表现，染色质固缩，聚集于核膜下，胞质空泡化。经方差分析显示FGR组与正常对照组孕妇孕周、年龄、体重等比较，差异无显著性(P＞0.05)。胎儿生长受限组胎盘平均细胞凋亡率为0.51％(对照组为0.21％)；胎盘绒毛滋养细胞平均凋亡率为0.34％(对照组为0.10％)，与对照组比较，胎儿生长受限组细胞凋亡率明显增加，差异具有显著性(p＜0.01)。 结论：FGR组胎盘细胞平均凋亡率明显高于对照组，与孕妇的年龄、孕周、体重等无关联，提示胎盘细胞凋亡在胎儿生长受限发病机制中可能起一定作用。

目录

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 胎儿生长受限与胎盘细胞凋亡关系的研究

致谢

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