奥卡西平和苯巴比妥对戊四氮诱导的癫痫大鼠神经元凋亡的影响

摘要

目的：奥卡西平是近几年在中国新上市的一种抗癫痫药，用于治疗成人及儿童癫痫部分发作或全身强直阵挛性发作。许多动物模型证实奥卡西平(OXC)和其单羟衍化物(MHD)对防止部分性和全身强直一阵挛性发作均有效，奥卡西平通过抑制电压敏感Na<'+>通道的持续、高频、反复点燃；抑制高电压激活的N型和P型CA<'2+>通道，导致了剂量依赖的突触后兴奋性谷氨酸能电位对纹状体神经元的抑制，最终减低谷氨酸释放，从而起抗癫痫效用。另外，在大鼠海马切片中，MHD通过增加电压敏感的k<'+>通道电流来降低点燃频率，提示了另一种抗癫痫机制。奥卡西平在体内分布广泛，易通过胎盘和血脑屏障，也能进入乳汁。 临床试验表明，奥卡西平治疗癫痫的疗效与苯巴比妥、卡马西平、苯妥英钠和丙戊酸钠相当，患者耐受性好，对肝酶诱导及自身诱导作用小，与其他药物相互作用较少，可作为传统抗癫痫药的替代药物。 苯巴比妥是传统抗癫痫药物，其对机体的各种机制及作用已相对明确，常作为新药观察的对照物。 癫痫发作可造成神经细胞的损害，并可导致细胞凋亡。细胞凋亡受多种基因控制，凋亡基因分为二大类：一类是促进凋亡的基因；另一类是抑制凋亡的基因。1988年Vaux等首次证实bcl-2基因高表达可明显维持细胞的存活。bax同源二聚体形成诱导细胞凋亡，bax-bcl-2异源二聚体形成抑制细胞凋亡。本课题用戊四氮制作癫痫大鼠模型，用奥卡西平、苯巴比妥进行干预，观察大鼠海马部形态改变和凋亡因子数量的阳性表达，以期明确奥卡西平的神经保护作用，为有效预防癫痫所致神经细胞的损害，控制癫痫发作提供参考依据。 方法： 1、研究对象：清洁级健康雄性4周龄Spragtje Dawley大鼠108只，随机分为6组： A：正常生理盐水组(18只)B：正常苯巴比妥组(18只)C：正常奥卡西平组(18只)D：痫后生理盐水组(18只)E：痫后苯巴比妥组(18只)F：痫后奥卡西平组(18只)。 2、实验方法：D、E、F三组连续5天腹腔注射戊四氮60mg/kg/d，制造癫痫模型。据Racine分级观察大鼠发作情况，连续5天Ⅳ-Ⅴ级发作，每次持续3-5分钟为模型制备成功。其余三组分别注射等量生理盐水。第6天起，A、D组腹腔注射生理盐水，B、E组腹腔注射苯巴比妥50mg/kg/d，C、F组给予奥卡西平80mg/kg/d灌胃。于喂药满9天、15天、21天处死取脑，做石蜡块，行HE、免疫组织化学染色。光镜观察各组脑片海马部凋亡细胞形态及数量上的改变。 3、统计学方法：采用SPSS10.0统计分析软件，采用方差分析方法统计分析，P值小于检验水平(a=0.05)，统计学上有意义。均数以标准差(X±S)表示，各组均数间两两比较行SNK检验，前后比较行配对t检验。 结果：HE染色，光镜下观察A、B、C三组相比形态学上未见明显差别(Fig-1，Fig-5)。可见海马区细胞完整，边缘清晰，胞核呈圆形、椭圆形，染色质核内分布均匀，核仁清晰；仅少许神经细胞空泡样变性，染色质边集，细胞肿胀呈圆形。 D、E、F三组可见海马区细胞边缘欠清晰，胞核、胞质深染，染色质边集、凝集成块(Fig.2，Fig.3)，部分可见凋亡小体形成(Fig.8)；可见细胞多数空泡变性(Fig.4，Fig.6)。D组可见凋亡细胞、坏死脱落细胞增多，细胞层数减少；E、F组可见大量凋亡细胞，细胞层数增多；F组更明显(Fig.7)。 免疫组织化学染色： bax/bcl-2细胞核浆均表达，着棕色为阳性表达。 正常A、B、C组大鼠海马区均有bc1-2、bax少量表达，9天、15天、21天A、B、C三组，组间比较P>0.05均无统计学意义。 D组bcl-2阳性细胞数表达由(均数±标准差)观察，比正常组增多，比痫后用药组减少。9天、15天、21天分别于各组比较P<0.05，有统计学意义。bax阳性细胞数表达由(均数±标准差)观察，比正常组、痫后用药组均增多。9天、15天、21天分别于各组比较P<0.05，有统计学意义。 E组bcl-2的表达由(均数±标准差)观察，比A、B、C组增多，但少与F组，于D组相比无明显区别；E组与A、B、C、F两两比较P<0.05，有统计学意义，与D组比较P>0.05无统计学意义。bax阳性细胞数表达由(均数±标准差)观察，比A、B、C、F四组表达增多，少于D组；9天时，E组与A、B、C、D、F两两比较P<0.05，有统计学意义。15天、21天分别于各组比较P>0.05，无统计学意义F组bcl-2的表达由(均数±标准差)观察，比A、B、C、D、E五组表达显著增多，F与A、B、C、D、E两两比较P<0.05有统计学意义。bax阳性细胞数表达由(均数±标准差)观察，9天、15天、21天时F组与A、B、C两两比较P>0.05无统计学意义。9天时F与D、E两两比较P<0.05，有统计学意义。15天时F组与D组比较P<0.05，有统计学意义。21天时与余五组比较P>0.05，无统计学意义。 喂药9天、15天、21天，大鼠海马内bcl-2、bax两种凋亡因子表达均为下降趋势。 结论： 1、戊四氮诱导的大鼠癫痫发作可引起海马部位神经元损伤，包括坏死和凋亡。 2、苯巴比妥能减轻海马区神经元的损伤，提示其具有神经保护作用。 3、奥卡西平能明显增强海马区神经元bcl-2基因的表达，降低bax的表达，海马区细胞无明显脱落。提示其可能通过调控bcl-2和bax基因的表达发挥神经保护作用。 4、奥卡西平、苯巴比妥对于正常鼠预防用药，对海马区神经细胞无明显作用，提示其神经保护作用主要存在于抗癫痫机制。 5、奥卡西平的抑凋亡作用和少的不良副作用要优于苯巴比妥。应用奥卡西平，海马区神经元bcl-2基因的表达要强于苯巴比妥，其对癫痫大鼠无应用苯巴比妥所引起的大鼠四肢乏力等副作用。

目录

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述几种抗癫痫药对癫痫大鼠脑细胞凋亡的影响

致谢

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