炎性标志物表达水平与大肠癌进展的相关性研究

摘要

目的:大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,目前发病率有逐年上升的趋势,虽然已经对其进行了广泛的研究,但其发生、发展的确切机制尚不十分明确。
　　 本研究探讨基质金属蛋蛋白酶-9(matri metalloproteinase-9,MMP-9)、环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2),Krüpple样因子-5(krüpple-like factor,IKLF/KLF5)等肿瘤相关蛋白表达水平与大肠癌进展的关系。
　　 方法:
　　 1.PCR分析:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术鉴定大肠癌组和对照组的MMP-9基因Q279R和-1562(C/T)多态性及等位基因频率分布。
　　 2.明胶酶图分析:将正常及大肠癌组织于冰浴下匀浆,离心分离上清,蛋白定量后取蛋白提取液40μg,进行明胶酶图分析,检测MMP-9活性。
　　 3.免疫组织化学染色:大肠癌组织用甲醛固定,做病理切片,进行免疫组织化学染色,观察MMP-9、COX-2和KLF5在大肠癌组织中的表达情况。
　　 结果:
　　 1 MMP-9基因Q279R多态性与大肠癌发生无相关性
　　 在我们研究的143名对象(60例大肠癌和83例正常对照)中,Q279R位点均为GG型和AG型和AA型等位基因。统计结果显示,AA基因型比例为8.3％(5/60)、AG基因型比例为43.3％(26/60)、GG基因型比例为48.3％(29/60);在非大肠癌的对照组,则分别为6.0％(5/83)、49.4％(41/83)、44.6％(37/83)。两组组间基因型分布比较差异无显著性(x2=0.645,P=0.724)。
　　 大肠癌组A、G等位基因频率分别为30.0％和70.0％,对照组分别为30.7％和69.3％,两组比较差异无显著性(x2=0.017,P=0.896)。
　　 2 MMP-9基因-1562(C/T)位点多态性与大肠癌发生无相关性
　　 PCR结果显示,在大肠癌组中,CC基因型比例为78.3％(47/60)、CT为21.7％(13/60);在非大肠癌的对照组,则CC为74.7％(62/83)、CT为24.1％(20/83)、TT为1.2％(1/83)。两组组间基因型分布比较差异无显著性(x2=0.872,P=0.647)。
　　 大肠癌组C、T等位基因频率分别为89.2％和10.8％,对照组分别为86.7％和13.3％,两组比较差异无显著性(x2=0.380,P=0.538)。
　　 3 MMP-9在大肠癌组织中的活性和表达变化
　　 明胶酶图分析显示:同一个体的肿瘤组织与癌旁正常组织比较,肿瘤组织中的MMP-9活性明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);在不同分期的肿瘤组织,Dukes C期MMP-9的活性高于DukesA期,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学染色也证实,MMP-9在Dukes C期中表达显著高于A期,有显著差异性(P＜0.05)。这些结果表明,MMP-9的表达水平升高与大肠癌发生发展显著相关。
　　 4.COX-2表达水平与大肠癌进展具有正相关性
　　 免疫组织化学染色结果显示:COX-2在Dukes A、B、C期中表达量有显著差异性。B期和C期的COX-2水平显著高于A期(P＜0.05)。
　　 5.KLF5表达水平随大肠癌进展而升高
　　 免疫组织化学染色结果显示:在Dukes A、B、C期的大肠癌中KLF5的表达水平逐渐升高,C期显著高于A期(P＜0.05)。
　　 结论
　　 1大肠癌组和对照组MMP-9基因Q279R、-1562(C/T)位点多态性分布无差异性,表明其与大肠癌发生无相关关系。
　　 2 MMP-9、COX-2、KLF5炎性标志物水平与大肠癌的Dukes分期有正相关性。

目录

文摘

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材料与方法

结果

附图、附表

讨论

结论

参考文献

综述 炎性标志物表达水平与大肠癌疾病研究进展

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