口腔癌患者治疗前后外周血中T淋巴细胞表型检测的意义

摘要

目的:口腔颌面部的恶性肿瘤在我国以舌癌、牙龈癌、颊癌等较为常见,然而其发病原因是由多种因素造成的,如环境因素、精神因素、免疫因素等。其中免疫因素备受众多学者的关注。口腔颌面部恶性肿瘤患者的免疫功能无论在早期或晚期病变均有可能比正常人群有所降低,以晚期病例尤为显著。因此,机体的免疫状态在恶性肿瘤的发生发展过程中有一定的参考价值。Fas/FasL是细胞凋亡的一条重要途径,细胞凋亡失控是肿瘤发生的一个重要因素,故Fas/FasL引导的细胞凋亡成为近年来医学研究的热点,Fas及其配体FasL系统的异常表达,不仅参与了肿瘤发生过程中细胞凋亡异常的调节,而且与肿瘤免疫逃逸机制有关。Fas、FasL的表达情况,是机体的免疫系统与肿瘤凋亡系统相互较量的一个重要环节,本试验旨在通过流式细胞术精确的检测口腔癌患者治疗前后外周血中T淋巴细胞各亚型的表达情况,主要是对CD4、Fas及FasL的检测,探讨Fas及FasL在口腔癌患者的发病机制所起的作用,使口腔癌的发病机制在免疫学的角度上得到进一步的深入了解,并为口腔癌的综合治疗提供一定的理论依据。
　　 方法:各取新鲜静脉血100μl,分别加入FITC标记的CD3单克隆抗体,FITC标记的CD4单克隆抗体,PE标记的CD8单克隆抗体及PE标记的CD56单克隆抗体各10μl,PE标记的Fas单克隆抗体10μl、FITC标记的CD4单克隆抗体与PE标记的Fas单克隆抗体各10μl、PE标记的FasL单克隆抗体10μl、FITC标记的CD4单克隆抗体与PE标记的FasL单克隆抗体各10μl,在室温下避光孵育1小时,向其内加入红细胞裂解液,裂解红细胞5分钟,加入PBS液洗去血红蛋白,并重新悬浮于1mlPBS中,以流式细胞仪检测T淋巴细胞各表型占淋巴细胞总量的百分比和T淋巴细胞上Fas+及FasL+T淋巴细胞所占的百分比及CD4+/Fas+和CD4+/FasL+T淋巴细胞所占的比例,并计算CD4+T细胞/CD8+T细胞的比值。
　　 结果:
　　 1.治疗前后口腔癌患者各项免疫指标的变化
　　 1.1口腔癌患者术后外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+T淋巴细胞所占比例分别为63.23±4.96％,42.37±3.96％,24.46±3.86％,14.60±5.17％CD4+/CD8+比值范围为1.77±0.34,CD3的表达较术前略有提高,但无统计学意义(P＞0.05),与健康对照组相比,明显降低(P＜0.05);CD4的表达较术前明显提高,但低于正常对照组(P＜0.05);CD8的表达明显比术前低(P＜0.05),但与正常对照组的差别已无显著性,CD4/CD8比值与术前相比明显回升,但仍未恢复至正常对照组水平(P＜0.05),CD56的表达与术前比较明显降低(P＜0.05),与对照组比较无统计学意义。1.2口腔癌患者经替加氟加奥沙利铂化疗,三周后再次采集患者外周血,检测其外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+T淋巴细胞所占比例分别为63.56±9.68％,37.55±9.13％,25.79±6.74％,18.61±8.23％,CD4+/CD8+比值范围为1.57±0.43;CD3的表达与化疗前无明显差别(P＞0.05),CD4的表达较化疗前明显升高(P＜0.05),CD8的表达较化疗前明显降低(P＜0.05),CD4/CD8比值较化疗前明显升高(P＜0.05),CD56的表达较化疗前无明显变化。
　　 2治疗前后口腔癌患者外周血中Fas、FasL的变化2.1口腔癌患者术后外周血中CD4+/Fas+、Fas+、CD4+/FasL+、FasL+T淋巴细胞的比例分别为6.30±1.67％、1.98±0.93％、0.70±0.28％、0.99±0.28％。CD4+/Fas+在术后的表达与术前对比有明显降低(P＜0.05);但Fas+的表达与术前比较无统计学意义(p＞0.05);CD4+/FasL+、FasL+的表达较术前均有明显提高(P＜0.05)。2.2口腔癌患者经替加氟加奥沙利铂化疗,三周后再次采集患者外周血,其外周血中CD4+/Fas+、Fas+、CD4+/FasL+、FasL+T淋巴细胞的比例分别为8.36±2.12％、2.01±1.19％、0.62±0.19％、0.95±0.23％。CD4+/Fas+、Fas+的表达较化疗前明显升高(P＜0.05),CD4+/FasL+、FasL+的表达较化疗前无明显变化(P＞0.05)。
　　 3不同临床因素与CD4+/Fas+、CD4+/FasL+表达的关系3.1口腔癌患者外周血中CIM+/Fas+、CD4+/FasL+的表达明显高于正常对照组(P＜0.05),Ⅲ+Ⅳ期患者的表达明显高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(P＜0.05);淋巴结出现转移的口腔癌患者CD4+/Fas+的表达明显高于无淋巴结转移的患者(P＜0.05),但CD4+/FasL+的表达在淋巴结转移的患者与无淋巴结转移的患者之间无明显差异。肿瘤直径大于3cm组CD4+/Fas+的表达明显高于肿瘤直径不超过3cm组的表达(P＜0.05),而CD4+/FasL+的表达与肿瘤直径大小无明显相关性。3.2年龄、性别、吸烟因素的不同与口腔癌患者外周血中Fas和FasL的表达无明显相关性。
　　 结论:
　　 1口腔癌患者与健康人比较辅助性T淋巴细胞降低,抑制性T淋巴细胞增多,机体免疫功能存在不同程度的降低,手术及化疗均可以解除部分免疫抑制现象,手术及化疗对于口腔癌患者的治疗是有效的。
　　 2口腔癌患者外周血中Fas的表达与肿瘤分期、是否有淋巴结转移以及肿瘤的大小可能有关,或许可以作为口腔癌诊断的一个免疫学标记物。
　　 3Fas/FasL系统在机体内是一把双刃剑,免疫淋巴细胞可借助它清除机体的肿瘤细胞,同时,肿瘤细胞亦可以通过高表达FasL,与机体活化的T淋巴细胞结合使其凋亡,对机体进行反攻,具体发病机制较复杂,有待进一步深入研究。

目录

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 Fas/Fasl与口腔肿瘤关系的研究进展

致谢

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