选择性多巴胺D3受体拮抗剂的筛选与评价

摘要

目的：多巴胺D3受体(D3R)选择性分布在药物依赖相关的脑区，在药物精神依赖发生发展过程中的作用日益受到了重视，靶向D3R防复吸药物的研究成为研究的热点。目前已发现了80余种选择性D3R配体，选择性D3R拮抗剂可能在防复吸方面更具前景。但现有化合物尚存在一些非预期的副作用。军事医学科学院毒物药物研究所七室设计合成了新的靶向D3R化合物，为了发现新型高选择性D3R拮抗剂，运用放射性配体受体结合实验对上述化合物进行了筛选，并评价其对精神依赖的作用。
　　 方法：采用放射性配体受体竞争结合实验研究7种新化合物对D3R和D2R的亲和力及选择性，初筛具有高选择性、高亲和力的D3R配体。为进一步研究其选择性，引进或建立了稳定或瞬时表达多种G蛋白耦联受体(GPCR)的细胞模型32种；采用放射性配体受体竞争结合实验研究化合物与多种受体的亲和力及选择性。采用[35S]GTPγS结合实验研究对具有高选择性、高亲和力的一种D3R配体对Gi或Gs耦联的GPCR的激动或拮抗活性；采用双波长激光共聚焦检测Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子的方法研究化合物对Gq耦联的GPCR的激动或拮抗活性。
　　 通过分析化合物静脉和口服给药后的大鼠血浆药时曲线计算化合物的大鼠生物利用度等参数，并观察化合物在大鼠肝微粒体中的稳定性。
　　 在体药效学研究，首先观察化合物单药单次给予对小鼠自发活动的影响，在不影响小鼠自发活动的前提下，选择合适的药物剂量，观察候选化合物对吗啡诱导小鼠行为敏化表达期的影响并评价候选化合物的抗阿片依赖潜能。
　　 结果：
　　 1、GPCR表达系统的建立：引进和建立了32种GPCR的瞬时及稳定的表达体系。
　　 2、化合物对D2R，D3R结合特性的研究：采用放射性配体结合试验研究发现，化合物Y-QA31对D3R表现出极高的亲和力(Ki=12.1±0.40pmol·L-1)，对D2R的亲和力为Ki=32.75±0.35nmol·L-1,Y-QA31对D3R的亲和力比D2R高2690倍，优于目前与D3R亲和力较好的化合物SB-277011A和NGB2904。
　　 3、化合物的受体选择性研究：Y-QA31与多数GPCR的亲和力很低，ICs0超过10μM，对D3R选择倍数超过1000倍；Y-QA31与组胺H1受体(IC50=568.5±0.1nM)，α1A（IC50=86.3±1.2nM）及α,1B（IC50=170.8±3.2nM）肾上腺素受体具有中等亲和力，对D3R的选择倍数接近100倍；与5-HT1A受体具有较高亲和力（IC50=3.5±0.2nM），对D3R的选择倍数小于100倍。
　　 4、化合物对多巴胺系统受体的作用性质研究：在[35S]GTPγS结合实验中，Y-QA31(10-10-10-5M)在稳定表达hD3R的细胞模型上没有激动活性，抑制激动剂喹吡罗（10μM）的激动活性；在稳定表达hD2R的细胞模型上，多次实验观察到Y-QA31(10-6-10-5M)有约30％的激动，不能排除Y-QA31对D2R的部分激动性质；抑制激动剂喹吡罗（10μM）的激动活性。Y-QA31对D3R、D2R具有阻断作用。
　　 5、化合物对非多巴胺系统受体作用性质研究：Y-QA31在大鼠海马组织的膜蛋白上没有激动活性，抑制5-HT1A选择性激动剂8-OH-DPAT(10μM)对5-HT1A受体的激动活性，表明Y-QA31对5-HT1A受体具有阻断作用。Y-QA31拮抗去甲肾上腺素(NA)引起的hα1AR-HEK293细胞内细胞内Ca2+释放，对α1A受体具有阻断作用；Y-QA31较弱的抑制α,1B受体和组胺H1受体激动剂的激动效应，具有较弱的阻断作用。
　　 6、初步药代动力学研究：Y-QA31的口服生物利用度约为44.48％，在大鼠微粒体中表现稳定。
　　 7、化合物的在体药理作用研究：Y-QA31（3.125-12.5mg·kg-1）不影响小鼠的自发活动，Y-QA31(6.25-12.5mg·kg-1)剂量依赖性地抑制吗啡诱导的行为敏化的表达。
　　 结论：Y-QA31为新型高选择性D3R阻断剂，在整体实验上具有抗阿片依赖作用，有可能成为一个潜在的防治阿片类药物依赖的先导化合物，其抗药物依赖潜能值得进一步深入研究。

目录

文摘

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选择性多巴胺D3拮抗剂的筛选与评价

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材料与方法

结果

附表

附图

讨论

结论

参考文献

综述 多巴胺D3受体拮抗剂治疗药物依赖研究的新进展

参考文献

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