益气养阴活血方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对肾脏血小板衍生生长因子B表达的影响

摘要

目的:糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)是糖尿病微血管并发症之一，是糖尿病特有的肾脏并发症，也是导致终末期肾病(end stage renal disease，ESRD)的主要原因之一。因此，在病变早期积极防治对延缓DN进展显得尤为重要。临床上应用益气养阴活血方能够起到防治糖尿病微血管病变及保护肾脏的效果。本实验通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，之后给予药物干预，观察益气养阴活血方对糖尿病大鼠的生化指标、肾脏组织形态学和血小板衍生生长因子B(PDGF-B)表达的影响，探讨本方保护早期肾脏病变的作用机制。
　　 方法:清洁级雄性Wistar大鼠57只，体重200±20g，适应性喂养1周后，随机分出12只作为正常对照组(N)，其余45只大鼠用于造模，根据参阅相关文献，用1％的链脲佐菌素枸橼酸缓冲液（枸橼酸缓冲液浓度为0.1 mmol/L，pH4.5），按55mg/kg体重，一次性腹腔注射，正常对照组给予相应体积的1％柠檬酸-柠檬酸钠溶液腹腔注射。72h后于大鼠的尾静脉采血，测定随机血糖浓度，若血糖≥16.7mmol/L，并观察到大鼠饮水量及尿量明显增多，则表示造模成功。
　　 将造模成功的大鼠随机分为糖尿病模型组(M)、益气养阴活血方组（简称中药组，H），厄贝沙坦组（简称西药组，W），每组15只。分组后各治疗组给药剂量按成人剂量的10倍灌胃，每日一次。中药组给予益气养阴活血方每日6.5mL/kg（相当于生药32.5g/kg）体重灌胃，西药组给予厄贝沙坦混悬液每日3.4mL/kg体重（相当于7.5mg/mL原药）灌胃，正常对照组与模型组每日给予同等体积的生理盐水灌胃。给药时间为8周，期间各组动物自由进食水。在第8周末用代谢笼收集24小时尿，记录尿量，用来测量计算24h尿微量白蛋白排泄率;并于末次灌胃后禁食不禁水12h，2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后股动脉取血用于化验各血液指标，取双肾制作标本，用于光镜下观察肾组织形态学变化，免疫组化法测定血小板衍生生长因子B的表达情况。
　　 结果:
　　 1、一般情况观察
　　 实验期间，正常对照组的大鼠精神状态良好，进食、饮水均正常，体重有明显增长，皮毛光滑，毛色鲜明，行动反应敏捷。模型组的大鼠则表现精神不振，有多饮、多食、多尿情况，形体逐渐消瘦，毛色枯黄，反应迟钝等情况。有些大鼠则出现肢体活动不利，腹部肿胀等症状。与模型组相比中药组与西药组大鼠的一般情况为轻。实验期间，模型组大鼠死亡1只，考虑死于活动不便，不能进食;中药组大鼠死亡2只，1只死于灌胃不当，另1只死于互相撕咬所致的感染。
　　 2、各组大鼠血糖及血脂的变化
　　 与正常组比较，模型组与两个治疗组的血糖均有升高，差别有统计学意义(P＜0.05）;与模型组及西药组比较，中药组的血糖有所下降，差别有统计学意义(P＜0.05）;而西药组与模型组之间无统计学差异（P＞0.05）。
　　 模型组、西药组及中药组的胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)均高于正常组(P＜0.05）;与模型组及西药组相比，中药组的TC和TG均有所降低，差别有统计学意义(P＜0.05）;而西药组与模型组比较，差别无统计学意义（P＞0.05）。
　　 3、各组大鼠体重及肾脏肥大指数的变化
　　 与正常组比较，模型组及两个治疗组体重均有降低，肾脏肥大指数增加，差别有统计学意义(P＜0.05）;模型组与两个治疗组比较，体重下降有统计学差异(P＜0.05），肾脏肥大指数增加有统计学意义(P＜0.05）。两个治疗组之间相比较，两指标差别无统计学意义（P＞0.05）。
　　 4、各组大鼠肾功能及24h尿微量白蛋白排泄率的变化
　　 模型组的BUN、SCr较正常对照组比较升高，有统计学意义（P＜0.05）;而中药组及西药组与模型组比较均可使BUN、SCr降低，有统计学差异(P＜0.05);中药组在改善肾功能方面与西药组比较无统计学差异（P＞0.05）。
　　 与正常组比较，模型组的24h尿微量白蛋白排泄率升高，差别有统计学意义(P＜0.05）;中药组及西药组与模型组比较24h尿微量白蛋白排泄率有所下降，差别有统计学意义(P＜0.05），但中药组与西药组之间比较无统计学差异(P＞0.05）。
　　 5、对糖尿病大鼠肾脏组织形态学的影响
　　 正常组大鼠的肾组织结构完整，未见增大肾小球，细胞纹理清晰，走形正常，胞浆的着色均匀，肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未见异常改变。模型组大鼠肾脏则可见肾小球体积增大，基底膜增厚，系膜细胞增生。中药组及西药组的组织形态变化均比模型组有不同程度的减轻。
　　 6、对糖尿病大鼠肾脏血小板衍生生长因子B(PDGF-B)表达的影响
　　 与正常组比较，模型组及两个治疗组大鼠的肾组织中血小板衍生生长因子B(PDGF-B)的表达高于正常组，经半定量分析显示，差异有统计学意义(P＜0.05）。经过药物干预后，两个治疗组与模型组比较，PDGF-B的表达均有不同程度减少，差别有统计学意义(P＜0.05）。中药组与西药组比较则无统计学差异(P＞0.05）。
　　 结论:
　　 1、益气养阴活血方可以保护肾功能，降低尿微量蛋白，延缓糖尿病大鼠肾脏的病理进展，说明本方对肾脏具有保护作用。
　　 2、益气养阴活血方对微血管病变的防治作用可能与其降低血糖，改善脂代谢，抑制血小板衍生生长因子B(PDGF-B)的表达有关。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 实验方法

结果

1 各组大鼠一般情况

2 各组大鼠的血糖、胆固醇及甘油三酯水平比较

3 各组大鼠的体重及肾脏肥大指数的比较

4 各组肾功能及24h尿白蛋白排泄率的比较

5 肾脏组织病理形态学观察

6 免疫组化法测肾组织中PDGF-B的表达及结果分析

附图

附表

讨论

1 立题依据

2 动物模型的评价

3 立法组方依据及方解

4 厄贝沙坦概述

5 益气养阴活血方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历