KCNQ型钾通道开放剂治疗三叉神经痛的作用研究

摘要

KCNQ型钾通道是电压依赖性钾通道(Kv)家族中的一员，目前报道有5个亚型，其中KCNQ2和KCNQ3亚型是构成神经系统M电流(Im)主要成分，由于M电流在神经兴奋性调节中发挥重要作用，因此KCNQ通道开放剂在治疗与兴奋性调节有关的疾病，比如癫痫、惊厥、疼痛等方面有很好的前景。目前上市的该类药物并不太多，一个是由葛兰素史克与万安特公司联合开发的Retigabine(瑞替加滨，RTG)，另一个是很早就在德国上市的Flupirtine（氟吡汀）。我们利用高通量筛选方法找到一个结构新颖的化合物，它属于吡唑并[1，5-a]嘧啶-7(4H)-酮类，代号为QO-58。前期细胞水平研究结果表明该物质对KCNQ2/3型钾离子通道有良好的开放活性，在癫痫动物模型上也表现出一定的治疗作用。为证实该药物是否具有治疗三叉神经痛的效果，我们设计了三叉神经痛慢性缩窄环术动物模型，考察了Retigabine和QO-58的治疗作用，其研究结果对于QO-58前期开发具有重要指导意义，同时对理解三叉神经痛发病机制及寻找有效治疗药物具有重要帮助作用。
　　 第一部分、SD大鼠三叉神经痛慢性缩窄环术模型的建立
　　 目的:建立三叉神经痛慢性缩窄环术动物模型，观察模型建成后特征性变化指标的改变。
　　 方法:雄性SD大鼠20只，体重250-300g，随机分成2组，每组10只，分为模型组和假手术组。模型组在大鼠右侧三叉神经分支眶下神经(ION)，用两根4.0铬制肠线间隔2mm行缩窄环术(CCI);假手术组在大鼠右侧相同位置做手术，只暴露眶下神经而不结扎。两组大鼠的左侧均不做处理。观察术后两组大鼠的行为学反应。用机械阈值测试器刺激大鼠左右侧鼻垫部，记录大鼠术前及术后不同时间机械刺激阈值。取造模后4w、8w、11w术侧大鼠眶下神经，做病理切片，进行组织学观察。
　　 结果:造模前，模型组和假手术组大鼠疼痛基础阈值无统计学差异（P＞0.05），模型组术后第9天疼痛阈值较术前及假手术组明显降低（P＜0.01）。术后9d至63d，模型组大鼠在ION支配区域内，出现痛觉超敏现象，与术前及对照组比较存在显著差异（P＜0.01），术后40d开始逐渐恢复，术后77d左右恢复至术前水平。术后4w，ION-CCI区域神经纤维肿胀，髓鞘脱失，正常结构消失;术后8w，神经纤维仍有脱髓鞘改变;术后11w，神经纤维密度较均匀，髓鞘与轴突比例与正常比较差别不大。
　　 结论:三叉神经痛慢性缩窄环术后大鼠对机械刺激的反应阈值呈现一个先升后降的变化趋势，在术后1至9周内出现典型痛觉超敏现象，伴随手术局部神经纤维脱髓鞘组织病理学改变。
　　 第二部分、RTG对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用
　　 目的:观察不同剂量的Retigabine(RTG)对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用，寻找有效剂量范围，评价其疗效。
　　 方法:雄性SD大鼠45只，体重250-300g。随机分为2组，假手术组6只;手术组39只。手术组大鼠行右侧三叉神经之眶下神经结扎术，假手术组只暴露眶下神经，但不结扎。术后给予保温，自由饮食，在不同时间点用Von-Frey机械刺激器测量大鼠的疼痛阈值，筛选符合要求的动物，随机分为6组，分别为RTG5、7.5、10、12.5、25mg/kg剂量组及模型对照组。术后15d，RTG组大鼠腹腔注射给予不同剂量的受试物，假手术组、模型组腹腔注射2ml/kg的生理盐水，连续给药5d。每天观察大鼠的行为学变化;并用Von-Frey法于给药前后不同时间点测定大鼠触须垫部的机械刺激阈值，分析每天测量最高疼痛阈值变化趋势，评价药物疗效。
　　 结果:与假手术组比较，手术组大鼠疼痛基础阈值无统计学差异(P＞0.05)。手术组39只动物有36只术后第9天疼痛阈值较术前及假手术组明显降低（P＜0.01），造模成功率为92％。术后第15d给予药物治疗，RTG四个剂量组5、7.5、10、12.5组在给药10min后，疼痛阈值明显增加(P＜0.01)，25mg/kg组由于出现严重不良反应被淘汰，模型对照组给药前后阈值无明显变化（P＞0.05）。RTG连续给药5d，每天给药后测得最高疼痛阈值与第1d相比均无统计学差异（P＞0.05），提示RTG从低到高各剂量组动物，连续给药不会产生耐受性。
　　 结论:5mg/kg的RTG对三叉神经痛治疗有效，并且呈现一定的剂量依赖性，但25mg/kg出现明显不良反应，提示其安全剂量范围较窄。
　　 第三部分、QO-58对三叉神经痛大鼠的疗效观察
　　 目的:观察QO-58对三叉神经痛模型大鼠的作用，并与RTG比较其治疗作用。
　　 方法:将25只SD大鼠随机分为2组，6只为假手术组，其余为手术组。手术组按照第一部分的建模方法制备大鼠三叉神经痛模型，术后14d，筛选手术模型成功的大鼠随机分为3组，分别是模型组:腹腔给予生理盐水;QO-58低剂量组(10mg/kg)、QO-58高剂量组(20mg/kg)，所有动物腹腔给药注射容积为2ml/kg。观察大鼠的行为学变化;采用Von-Frey法于给药前后不同时间点测定大鼠触须垫部的机械刺激阈值。连续给药5d，每天测量其行为及疼痛阈值变化，评价其耐受情况。
　　 结果:假手术组手术前后疼痛阈值无明显变化（P＞0.05）在13g左右波动。手术组19只大鼠术后经疼痛阈值筛选有18只动物造模成功，造模成功率94.7％。模型组注射生理盐水前后疼痛阈值无显著变化(P＞0.05)QO-58低、高两个剂量组大鼠给药后，疼痛阈值虽然有所上升但与模型组比较无统计学差异（P＞0.05）。
　　 结论:QO-58在10mg/kg和20mg/kg剂量下腹腔给药，对三叉神经痛模型大鼠的机械刺激疼痛阈值没有明显提高。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 SD大鼠三叉神经痛慢性缩窄环术模型的建立

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 RTG对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 QO-58对三叉神经痛大鼠的疗效观察

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 原发性三叉神经痛的发病特点、病因及治疗

致谢

个人简历