AFP-L3和GP73联合检测在原发性肝癌诊断及疗效评估中的应用

摘要

目的:肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是一种恶性程度高、进展快、预后差的恶性肿瘤。临床上肝癌确诊时已多属中、晚期，又缺乏有效治疗，术后易复发及远处转移，预后较差，因此早诊断、早治疗显得尤为重要。甲胎蛋白(AFP)是目前诊断原发性肝癌最重要的肿瘤标记物，已被广泛用于肝癌的普查、诊断、判断治疗效果和预测复发，但AFP的敏感性和特异性较差。不同病变组织产生的甲胎蛋白含有的糖基不同，因此与植物外源性凝集素的亲和性也不同，借此可对AFP的来源作出判断，共分为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，其中甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)为凝集素结合型，是原发性肝癌细胞所特有。临床研究发现，AFP-L3对肝癌的诊断具有很高的准确率，比单纯应用总AFP能显著提高准确率。高尔基体蛋白73(GP73)是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白，在正常人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞很少甚至不表达。乙肝病毒携带者的GP73水平虽高于健康者和非肝病患者，但远低于肝癌患者。GP73在肝癌诊断中的敏感性和特异性显著高于AFP。
　　 本研究采用AFP-L3、GP73联合检测，以期提高肝癌诊断的敏感度和阳性检出率，对肝癌作出早期诊断，并将AFP-L3、GP73在肝癌治疗前后的变化作为评价疗效的指标，指导临床。
　　 方法:选择我院2010年6月至2011年6月门诊就诊，健康体检及住院患者共110例，将研究对象分为3组:(1)原发性肝癌组:34例，（男25例，女9例），入院前未接受过治疗，年龄(34～69)岁，平均(50.2±8.2)岁，均经临床、B超、病理检查确诊;(2)肝炎、肝硬化组:46例，（男31例，女15例），年龄(28～65)岁，平均(46.6±8.8)岁，根据临床、B超、CT等综合检查诊断，并排除有肝占位;(3)健康对照组30例(男18，女12)，随机选择来我院体检人群，年龄(30～55)岁，平均(45.2±9.2)岁。清晨空腹抽取静脉血3ml，分离血清，-20℃保存备用。AFP-L3％测定: AFP-L3的分离采用微量离心纯化柱，柱内装有耦联了小扁豆凝集素(LCA)的琼脂糖，可以特异结合AFP-L3，经过离心清洗洗去不结合的AFP，然后加入洗脱液，离心后收集的洗脱液中含有AFP-L3，然后应用化学发光法检测总AFP和AFP-L3的含量，再计算AFP-L3占AFP总量的百分比(AFP-L3)，以美国FDA批准AFP-L3≥10％作为阳性判断标准。血清GP73测定:采用酶联免疫定量方法检测，阳性结果为≥150ng/ml。
　　 原发性肝癌患者34例接受射频消融治疗后2月，复查AFP-L3％，GP73。观察AFP-L3％、GP73在肝癌治疗前后的变化。
　　 结果:
　　 1 、各组AFP-L3％、GP73测定结果。
　　 HCC组、肝炎肝硬化组和健康对照组血清标本AFP-L3％的测定结果分别为35.40(1.82～88.92)％、5.39(0.88～18.64)％、2.82(0.62～3.65)％,GP73的测定结果分别为243.14(118.54～362.75)、137.52(102.28～189.43)、45.78(37.22～51.82) ng/mL。各组间数据总体比较经Kruskal-Wallis检验显示，三组间GP73、AFP-L3％的差异均有统计学意义(P＜0.05)。组间两两比较经Nemenyi检验结果显示，HCC组血清AFP-L3％与肝炎肝硬化组及健康对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)，血清GP73水平差异亦有统计学意义(P＜0.05)。肝炎、肝硬化组与健康对照组GP73水平比较差异有统计学意义(P＜0.05)，AFP-L3％水平差异亦有统计学意义(P＜0.05)。
　　 2、各组血清AFP-L3％和GP73检测阳性率分布。
　　 血清AFP-L3％阳性率在健康对照组、肝炎肝硬化组和HCC组间存在显著差异(P＜0.05)，健康对照组中没有检测到AFP-L3％阳性个体;肝炎、肝硬化组阳性率为13.04％，HCC组阳性率为64.70％。血清GP73阳性率在健康对照组、肝炎肝硬化组和HCC组间存在显著差异(P＜0.05)，健康对照组中也没有检测到GP73阳性个体;肝炎、肝硬化组阳性率为26.08％，HCC组阳性率为58.82％。
　　 3、AFP-L3％与GP73联合检测。
　　 34例HCC患者中单独检测AFP-L3％时，检出阳性患者22例，敏感度为64.7％，特异度为90.79％;单独检测GP73时，检出阳性患者20例，敏感度为58.82％，特异度为84.21％;当使用AFP-L3％与GP73联合检测时，检出阳性患者31例，敏感度达到91.17％，较AFP-L3％或GP73单项检测时明显提高，有统计学意义(P＜0.05)，且特异度为89.47％，仍保持在较高水平(P＜0.05)。
　　 4、AFP-L3％、GP73在治疗前后的变化。
　　 4.1、治疗前后AFP-L3％、GP73阳性率比较。
　　 34例HCC患者行射频消融治疗，治疗前血清AFP-L3％阳性检出率为64.70％，血清GP73阳性检出率为58.82％;治疗后血清AFP-L3％阳性检出率为38.24％，血清GP73阳性检出率为32.35％;血清AFP-L3％和GP73阳性检出率治疗后均较治疗前显著下降(P＜0.05)差异均有统计学意义。
　　 4.2、治疗前后AFP-L3％、GP73检测值比较。
　　 34例HCC患者行射频消融治疗，治疗前血清AFP-L3％检测值为35.4(1.82～88.92)％，治疗后降至14.02(0.88～67.54)％;治疗前GP73检测值为243.13(118.54～362.75)，治疗后降至161.94(102.28～308.43);血清AFP-L3％GP73检测值治疗后均较治疗前显著下降。差异均有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、HCC组AFP-L3％和GP73的阳性检出率显著高于肝炎肝硬化组和健康对照组。
　　 2、AFP-L3％与GP73联合检测，敏感度较GP73或AFP-L3％单项检测时明显提高，且特异度仍保持在较高水平，AFP-L3％与GP73联合检测有助于提高HCC的辅助诊断水平。
　　 3、HCC患者射频消融治疗后AFP-L3％和GP73检测值和阳性检出率均明显降低，血清AFP-L3％和GP73检测可作为HCC疗效的辅助判定指标。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 临床资料

2 实验仪器

3 实验试剂

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1 各组AFP-L3％、GP73测定结果

2 各组血清AFP-L3％和GP73检测阳性率分布

3 AFP-L3％与GP73联合检测

4 AFP-L3％、GP73在治疗前后的变化

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 原发性肝癌的肿瘤标志物甲胎蛋白及其异质体和高尔基体糖蛋白-73的研究概况

致谢

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