A4GnT基因rs2246945位点多态性与汉族人群幽门螺杆菌胃病的相关研究

摘要

幽门螺杆菌，(Helicobacter pylori，Hp)是由诺贝尔奖获得者BarryJ.Marshall和J.Robin Warren在1983年首次从慢性胃炎患者中分离出来。是一种单极的、多鞭毛、螺旋形弯曲、末端钝圆的微需氧革兰阴性杆菌。在全球有50％以上的感染率，尤其在发展中国家则更为高。幽门螺杆菌感染是多种胃部疾病的致病因素（慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜溃疡、胃黏膜相关淋巴组织、淋巴瘤和胃癌）。在1994年，世界卫生组织把幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌原。
　　虽然幽门螺杆菌的感染率很高，但多数感染者未并未表现出来临床症状或只是存在一些慢性活动性胃炎症状。因此推断对幽门螺杆菌有着自然的免疫能力。研究表明，在人体胃黏膜的贲门腺、幽门腺、颈粘液腺以及十二指肠Bruuner's腺等部位的细胞之中存在α-1，4-N-乙酰葡糖胺转移酶(α-1，4-N-acetyglucosaminyltransferase，A4GnT)，它是一种糖基转移酶。该转移酶能使N-乙酰葡糖胺转移到具有核2分支O-聚糖的β半乳糖残基上，从而形成αGlcNAc末端。经研究发现，在人体的胃腺粘液中，如O-聚糖黏蛋白的末端链接有αGlcNAc，则具有天然的抗菌素作用，该物质可以抑制幽门螺杆菌的细胞壁中α-葡糖胆固醇的生物合成，使其对幽门螺杆菌的繁殖起到抑制作用。所以推测存在于胃腺粘液细胞中的A4GnT可能在感染者的胃腺粘液蛋白O-聚糖上形成α-1，4-N-乙酰葡糖胺，从而可以阻止幽门螺杆菌对胃黏膜深层的侵入，最终对胃黏膜起到天然的保护作用。而在A4GnT基因编码区单核苷酸多态性位点(Single-nucleotidepolymorphism，SNP)rs2246945，使A4GnT蛋白质218位的氨基酸种类不同，因此可能造成A4GnT空间结构差异，使其催化功能发生改变，而引起A4GnT催化产物αGlcNAc的表达量变化。其含量的变化将影响胃粘膜对幽门螺杆菌的防御能力。因此分析中国汉族人群A4GnT基因rs2246945位点多态性与幽门螺杆菌相关胃黏膜病变的关系，将有助于了解A4GnT对幽门螺杆菌感染对胃粘膜损害的作用机制。
　　目的:研究中国汉族人群A4GnT基因编码区rs2246945 SNP位点基因多态性，探讨上述SNP位点与幽门螺杆菌胃粘膜病变的相关性。
　　方法:
　　1.标本收集:幽门螺杆菌阳性胃病理活检标本从河北医科大学第三医院胃镜室中收集获得，并用组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA。幽门螺杆菌阴性血清以及血浆标本从体检结果正常的人群中获得，并用抗幽门螺杆菌抗体试剂盒确诊为抗幽门螺杆菌抗体阴性的标本通过血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA。
　　2.Mis-match PCR(mismatch amplification mutation assay PCR)反应:针对SNP位点设计2对错配引物，特异性扩增不同基因型SNP，PCR反应条件为:95℃预变性5min，然后95℃变性40sec，58℃退火40sec，70℃延伸45sec共30循环。取6μlPCR产物2％琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析系统扫描拍照进行PCR产物鉴定。
　　3.测序反应:应用Beckman-culter CEQ8000型遗传分析仪，采用直接测序法分析MAMA-PCR检测PCR SNP位点。
　　4.统计学分析:计算各基因型及等位基因频率并以Hardy-Weinberg平衡检测所选样本的群体代表性。计量资料以x±s表示，组间基因频率和基因型频率比较采用x2检验。所有数据均采用SPSS19.0统计软件进行处理，以P＜0.05为有统计学差异。
　　结果:在病例组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡前提下，对病例组和对照组A4GnT中rs2246945的三种基因型进行卡方检验，结果发现基因型分布在两组间存在统计学差异(x2=24.833，P＜0.05)。对基因型进一步分析发现，AA基因型在病例组分布频率为45.52％，对照组为36.42％，病例组有高于对照组的趋势，但两组间不具有统计学差异(x2=2.067，P＞0.05，OR值=1.514，95％CI为0.859-2.670)，CC基因型在病例组分布频率为6.2％，显著低于对照组的23.18％。两组间具有统计学差异(x2=12.706，P＜0.05)。将病例组和对照组中CC基因进行比值比，发现CC基因型与降低幽门螺杆菌感染有着显著地相关性（OR=0.202，95％CI为0.079-0.520）。另外AC基因型在病例组分布频率为48.37％，对照组为40.40％，病例组有高于对照组的趋势，但两组间不具有统计学差异（x2=1.299，P＞0.05，OR值=1.385，95％CI为0.791-2.425）。
　　结论:
　　1.A4GnT中rs2246945的CC基因型与降低幽门螺杆菌感染有着显著地相关性。
　　2.A4GnT中rs2246945的AA基因型与幽门螺杆菌感染无统计相关性，但存在增高幽门螺杆菌感染风险的趋势。
　　3.A4GnT中rs2246945的AC基因型与幽门螺杆菌感染无统计相关性，但存在增高幽门螺杆菌感染风险的趋势。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 试验方法

3 统计学分析

结果

1．基础统计

2．基因多态性的检测

3 统计

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 基因多态性与幽门螺杆菌感染及其继发性疾病的关系

致谢

个人简历