MyD88、TRAF6在横纹肌溶解致急性肾损伤中的作用及盐酸戊乙奎醚干预的影响

摘要

目的：
　　横纹肌溶解症（rhabdomyolysis,RM）是指由多种原因引起的横纹肌细胞溶解、破坏，以及肌内容物释放进入血液循环，导致的生化紊乱及多脏器损伤的临床综合征。近年来，随着生活习惯的变化，由于长跑、进食小龙虾、醉酒等导致的RM发病率明显升高，严重者危及患者生命。肾脏是RM最多见的受累器官，急性肾损伤(acutekidneyinjury，AKI)伴随RM整个病程，部分发展至急性肾衰竭的患者由于缺乏有效治疗而不愈。研究发现炎症反应、氧化应激、Ca2+稳态失调、细胞的毒性作用、活性氧以及自由基等是其重要病理生理机制，其中炎症反应作为人类绝大多数损伤性疾病的重要病理机制，在急性肾损伤中的作用尤其受到重视。髓样细胞分化因子88（Myeloidifferentiationfactor88,MyD88）和肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumour-necrosisfactorreceptor-associatedfactor6,TRAF6)为炎症反应的重要转导蛋白，在多条信号途径中发挥关键作用。本实验通过肌注甘油建立大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的动物模型，观察肾脏损伤情况，并应用免疫组化染色和westernblot方法检测大鼠肾脏MyD88和TRAF6的表达，对横纹肌溶解致急性肾损伤的发病机制进行研究，同时观察了盐酸戊乙奎醚干预对其保护作用。通过我们的研究有望对横纹肌溶解致急性肾损伤的发病机制有进一步了解，对临床防治提供理论及实践依据。
　　方法:
　　将42只清洁级SD大鼠随机分为:①对照组(Control，CN组,n=6)：给大鼠双后肢肌注生理盐水；②急性肾损伤模型组(AKI组，n=18)，给大鼠双后肢注射甘油；③盐酸戊乙奎醚组(PenehyclidineHydrochloride,P组,n=18)，在甘油肌注前30分钟分别腹腔注射盐酸戊乙奎醚。AKI组和P组根据注射及取材时间又分为三个亚组：1h组、6h组和24h组，每组6只大鼠。在相应时间点腹腔麻醉后，收集血液及肾组织标本。对血清指标行肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和磷酸肌酸激酶(CK)测定；肾脏组织行HE染色，观察病理学改变；应用免疫组化染色及westernblot法检测肾组织MyD88和TRAF6蛋白的表达。统计分析：实验数据均采用IBMSPSS21.0软件包进行统计学处理，计量资料以均数±标准差(-x±s)表示。各组间均数比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，以P<0.05认为有统计学意义。
　　结果：
　　（1）与CN组比较，AKI组BUN、Cr、CK均明显增高（P<0.01），其中BUN、Cr浓度呈逐渐升高趋势，CK也升高，但在6小时达到高峰，后回落。P组BUN、Cr、CK浓度较对照组也明显升高（P<0.01），且与AKI组趋势相同，但与同期AKI组相比，Cr、BUN浓度明显降低（P<0.05，P<0.01），CK浓度下降不明显（P>0.05）。（2）HE染色显示CN组大鼠肾组织结构完整、形态无明显变化；AKI1h组肾小管上皮细胞结构欠清、轻度水肿、呈颗粒状变性，肾小球皱缩；AKI6h组可见肾小管管腔扩张，小管上皮细胞肿胀、空泡样变，管腔内出现大量管型，间质内炎症细胞浸润；AKI24组肾小管管腔明显扩张,部分肾小管上皮细胞出现坏死、脱落、刷狀缘消失，远端肾小管腔内可见管型，P各组较同期AKI组损伤明显减轻；（3）免疫组化结果显示：1）MyD88在CN组大鼠肾组织中有微弱表达，与CN组相比，在AKI1h、AKI6h、AKI24h组表达逐渐增加（P<0.01），P组也随时间表达增强(P<0.05，P<0.01)；P1h、P6h、P24h组较同期AKI各组表达减少（P<0.05,P<0.01）。2）TRAF6在CN组大鼠肾组织中表达量较少，在AKI1h、AKI6h、AKI24h组，肾组织TRAF6蛋白的表达逐步升高，均明显高于对照组（P<0.01），P组与CN组比较在6h、24h组随时间增强(P<0.01)，1h组增强不明显(P>0.05)；P1h、P6h、P24h组较同期AKI各组表达减少（P<0.05,P<0.01）；（4）WestenBlot结果显示：MyD88、TRAF6蛋白含量AKI1h，AKI6h和AKI24h均明显高于正常肾脏组织，且进行性升高（P<0.01）；MyD88在P各组蛋白表达与CN组相比均明显升高，与同期AKI组相比明显降低，各组间均有统计学差异（P<0.05,P<0.01），TRAF6在P组表达也随着时间上调，但在1h组上调不明显(P>0.05)，在6h、24h组强于CN组(P<0.01)；P组肾组织TRAF6表达与同期AKI组相比均下调(P<0.05，P<0.01)。
　　结论：
　　1、甘油肌注致横纹肌溶解过程中大鼠肾脏组织MyD88、TRAF6表达上调,提示二者参与了横纹肌溶解致急性肾损伤的进程，炎性反应在此损伤过程中发挥着重要作用。
　　2、盐酸戊乙奎醚干预后肾组织TRAF6、MyD88的表达下调，盐酸戊乙奎醚通过下调TRAF6、MyD88的表达，进而抑制炎性反应，可能其为减轻横纹肌溶解致急性肾损伤的重要保护机制。

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前言

材料与方法

1 材料

2实验动物

3 实验方法

4 指标检测及方法

5统计学处理

结果

1 一般情况的变化

2血清肾功能指标的变化

3大鼠肾组织病理学的变化

4免疫组化

5 Western Blot 肾组织MyD88、TRAF6蛋白的表达变化

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:TLR/MyD88信号通路与肾脏病

致谢

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