鲨鱼软骨粘多糖的提取、分离与功能性研究

摘要

粘多糖是由糖苷键连接起来的醛糖或酮糖组成的天然分子,几乎存在于所有的有机体中,包括动物、植物、微生物(细菌和真菌).粘多糖具有广泛的生理活性,如抗病毒、抗肿瘤、抗凝血、降血糖、降血脂、抗溃疡、抗感染等多种生理功能.该实验就鲨鱼软骨粘多糖进行了提取和分离,筛选了最佳提取方案和分离纯化措施.结果显示0.3mol/L的氢氧化钠(60~70℃)粘多糖的得率较高.采用阴离子树脂D-241和DEAE-纤维素联合作用分离粘多糖效果较好,重复使用一次或两次DEAE-纤维素可以使纯化的效果更佳.文章也对鲨鱼软骨粘多糖的功能性进行了研究,此研究主要是针对抗肿瘤和抗衰老两方面的功能展开的.该文首先通过体外培养对鲨鱼软骨粘多糖的抗肿瘤活性进行了研究,将对数生长期的细胞制成细胞悬液,调整细胞浓度为5×10<'4>个/ml,接种于24孔培养板,每孔加100μ l细胞悬液.实验组加入受试物(鲨鱼软骨粘多糖),并且设2个浓度梯度.培养72小时后观察实验结果.实验结果证明鲨鱼软骨粘多糖对血癌细胞K562的生长具有一定抑制作用,并且其作用效果和浓度存在一定的相关性,粘多糖的浓度在5％时对肿瘤细胞的抑制作用要比在2.5%时的作用强;另外由于活细胞对台盼蓝染料具有排斥作用,不易着色,而死细胞则没有此功能从而被染料着色.染色结果说明:在添加粘多糖的实验组,活细胞率大大下降,所以鲨鱼软骨粘多糖能在一定程度上抑制和杀死K562细胞.文章采用果蝇作为抗衰老的实验动物对鲨鱼软骨的抗衰老活性进行了探讨,试验组果蝇的平均寿命增长5.12-6.65天,最高寿命增长5.40-6.17天,此结果表明鲨鱼软骨粘多糖能明显的延长实验果蝇的平均寿命和最高寿命.果蝇头部的蛋白质电泳结果说明,在果蝇的衰老过程中一些特定的蛋白质发生了变化,对照组的蛋白带变化较明显而实验组的变化与对照组相比不太明显,由于这些蛋白质的改变是由于特定基因表达的结果,从而认为:在果蝇食用鲨鱼软骨粘多糖后,一方面,体内的多糖环境抑制或减缓了某些跟衰老相关的基因的表达;另一方面,由于机体的免疫力增强,从而能有效的抵制体内外不良的环境的侵袭,在此环境下相应的长寿基因得到较好的表达,同时也抑制了衰老基因的表达.但是鲨鱼软骨粘多糖对雌性和雄性果蝇的影响存在一定的差异.

目录

文摘

英文文摘

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1引言

1.1鲨鱼软骨粘多糖的研究状况

1.1.1鲨鱼软骨粘多糖的组成和结构

1.1.2鲨鱼软骨粘多糖的生理药物活性

1.2.抗肿瘤功能研究

1.2.1肿瘤的危害

1.2.2肿瘤的治疗与预防

1.2.3多糖的抗肿瘤作用

1.2.4鲨鱼软骨的抗肿瘤特性

1.3抗衰老功能性检测

2实验材料与实验方法

2.1实验材料

2.1.1实验原料

2.1.2实验主要试剂

2.1.3实验主要仪器、设备

2.2实验方法

2.2.1软骨粘多糖的提取

2.2.2软骨粘多糖的纯化

2.2.3聚丙烯酰胺凝胶电泳法定性分析

2.2.4定量分析

2.2.5细胞培养

2.2.6抗衰老试验

3结果与分析

3.1粘多糖含量的含量测定及提取工艺的确定

3.1.1葡萄糖醛酸标准曲线的绘制

3.1.2粘多糖的含量测定

3.2电泳实验结果

3.2.1鲨鱼软骨和羊软骨粗提物的成分分析

3.2.2软骨粘多糖的分离与纯化

3.3细胞培养结果

3.3.1抗肿瘤作用电镜观察

3.3.2 MTT比色的实验结果

3.3.3活细胞百分率的计算

3.4抗衰老试验结果

3.4.1存活曲线

3.4.2平均寿命

3.4.3最高寿命

3.4.4电泳结果

4讨论

4.1粘多糖提取

4.2抗肿瘤检测

4.3抗衰老试验

5结论

6参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简介

致谢