马铃薯Y病毒CP基因的分子变异

摘要

本试验的只要目的是以主要烟草产区的PVY分离物为材料，对其进行血清学和生物学鉴定，明确不同地区分离物的分子差异、株系种类和进化关系。同时制备高质量的PVY抗血清，为以抗体为基础的检测和实验方法提供保证。　　将PVY毒原摩擦接种于白肋烟扩繁后，采用PEG沉降及超离心的方法进行病毒的提纯。提纯的病毒经电镜观察到大量线状病毒粒体，SDS-聚丙烯酰氨电泳结果显示提纯病毒的分子量为22KD，且杂蛋白较少。提纯病毒免疫动物，进行PVY抗血清的制备，经间接ELISA法测定血清效价为8192。新制备的血清与健康烟草和RSV，SCMV均无血清学反应且经Western检测验证有较好的特异性。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及学位论文版权使用授权书

1引言

1.1马铃薯Y病毒属的研究现状

1.1.1马铃薯Y病毒属的生物学特性研究

1.1.2马铃薯Y病毒属的分子生物学研究

1.1.3马铃薯Y病毒属分类标准的确立

1.1.4马铃薯Y病毒

1.2马铃薯Y病毒分子变异研究进展

1.3本试验的研究目的和意义

2材料与方法

2.1供试毒原及烟草品种

2.2抗血清、质粒、菌株及引物

2.3试剂及酶类

2.4烟草病毒的采集

2.5烟草病毒的生物学鉴定和繁殖

2.6马铃薯Y病毒的纯化及特性研究

2.6.1试剂的配制

2.6.2病毒的提纯

2.6.3病毒液的侵染性测定

2.6.4病毒粒体的形态观察

2.6.5提纯病毒的紫外吸收特性

2.6.6提纯病毒的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.7抗血清的制备及效价、特异性的测定

2.7.1抗血清的制备

2.7.2效价及特异性测定

2.8血清学检测

2.8.1间接-ELISA法

2.9病毒RNA的提取

2.10反转录－聚合酶链式反应

2.10.1反转录

2.10.2聚合酶链式反应

2.11目的基因转化大肠杆菌

2.11.1 DNA片段的纯化

2.11.2 PCR产物与pGEM-Teasy载体的连接

2.11.3大肠杆菌感受态细胞的制备

2.11.4连接产物转化感受态细胞

2.11.5碱裂解法小量提取质粒

2.11.6重组克隆的酶切鉴定

2.12序列测定与分析

2.12.1 DNA序列测定

2.12.2序列测定结果的计算机分析与比较

3结果与分析

3.1病毒粒体的提纯及其特性研究

3.1.1提纯病毒的侵染性检测

3.1.2提纯病毒的电镜观察

3.1.3提纯病毒的紫外吸收

3.1.4提纯病毒的纯度和分子量测定

3.2抗血清的制备及其效价和特异性测定

3.3样品的鉴定和毒原的获得

3.3.1样品的采集和血清学检测

3.3.2 PVY的扩繁和生物学鉴定

3.4 PVY CP基因的克隆与序列分析

3.4.1 PVY CP基因的RT-PCR扩增及克隆

3.4.2 PVY CP基因序列测定

3.5中国烟草分离物PVY CP基因的分子变异特征

3.6系统进化树分析

4讨论

4.1马铃薯Y病毒的提纯及抗血清的制备

4.2马铃薯Y病毒CP基因的分子变异

5结论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文

作者简历

致 谢