石菖蒲及其单体成分抗LPS诱导小鼠流产作用的研究

摘要

课题主要研究石菖蒲及其单体成分槲皮素、乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保胎作用。 通过免疫组化检测子宫组织中CD<,4><'+>／CD<,8><'+>T淋巴细胞、巨噬细胞，流式细胞仪检测脾脏协同刺激分子CD80<'+>/CD86<'+>的表达以及ELISA方法检测子宫匀浆和血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10和孕酮的含量变化，探讨石菖蒲及其单体成分的保胎作用及可能的作用机制，阐明妊娠早期母胎界面的免疫状态，寻找预防早期胚胎丢失的措施。试验分为6组，A组为对照组，B组为LPS流产模型组，C～E组分别为不同石菖蒲成分药物预防组，分别于孕4～7d灌服槲皮素、乙酸龙脑酯、槲皮素+乙酸龙脑酯和石菖蒲煎剂，孕7d尾静脉注射LPS(0.10μg/鼠)，9d剖杀。 结果表明LPS流产模型组的流产率和胚胎吸收率都达到100％，具有高CD<,4><'+>T淋巴细胞和巨噬细胞及偏向于Th1反应的特点，适合作为研究药物保胎作用的流产模型。预先口服不同石菖蒲成分后，流产率和胚胎吸收率都有不同程度的降低。其中以槲皮素+乙酸龙脑酯合用组的保胎效果最为明显，流产率和胚胎吸收率分别降至30％和28.6％，与LPS流产模型组差异极显著，基本达到正常水平。子宫组织中1111型细胞因子IFN吖的含量降低，Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高，均较LPS流产组差异极显著；流式细胞仪检测小鼠脾脏CD80<'+>/CD86<'+>的表达，结果表明，应用保胎药物后能明显提升因LPS所引起的CD86表达抑制状态，协同刺激Th0细胞向Th2方向转化，产生有利于妊娠的Th2型细胞因子；免疫组化结果表明，应用保胎药物后，子宫组织中CD<,4><'+>T淋巴细胞和巨噬细胞的数量较LPS流产模型组显著降低，CD<,4><'+>/CD8<'+>比值基本恢复到正常水平，表明槲皮素和乙酸龙脑酯合用能够减少子宫中CD<,4><'+>T淋巴细胞和巨噬细胞的数量，对妊娠的维持起到保护作用。所以，LPS诱导小鼠流产与母．胎界面免疫平衡失调有关，中药石菖蒲通过减少子宫组织中CD<,4><'+>T细胞和巨噬细胞的数量，提升脾脏中CD86<'+>的表达，刺激Th0细胞向Th2方向转化，一方面增加’rh2型细胞因子IL-4和IL-10的含量，另一方面降低Th1型细胞因子IFN-γ,的水平，使Th1/Th2免疫平衡向有利于妊娠的Th2方向偏移，从而起到促孕保胎的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

声明

1引言

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试剂及药品

2.1.2仪器设备

2.2试验方法

2.2.1比较不同石菖蒲成分的保胎作用

2.2.2 ELISA测定子宫组织及血清中4种细胞因子的含量

2.2.3流式细胞仪检测共刺激分子CD80/CD86的表达

2.2.4 ELISA测定子宫组织中孕酮的含量

2.2.5免疫组化测定子宫CD4+、CD8+T淋巴细胞和巨噬细胞的数量及分布

2.3统计分析

3结果

3.1不同石菖蒲成分保胎作用的比较

3.2不同石菖蒲成分对子宫重量的影响

3.3不同石菖蒲成分对细胞因子含量的影响

3.3.1对IL-2含量的影响

3.3.2对IFN-γ含量的影响

3.3.3对IL-4含量的影响

3.3.4对IL-10含量的影响

3.4不同石菖蒲成分对小鼠脾脏CD80+、CD8+6表达的影响

3.5 Th1/Th2细胞因子与CD80+/CD86+共刺激分子的关系

3.6不同石菖蒲成分对子宫孕酮含量的影响

3.7不同石菖蒲成分对子宫免疫细胞的影响

3.7.1对CD4+T淋巴细胞的影响

3.7.2对CD8+T淋巴细胞的影响

3.7.3对巨噬细胞的影响

4讨论

4.1 LPS对小鼠的流产效果

4.2石菖蒲及其单体成分的安胎作用

4.3妊娠早期母-胎界面免疫平衡的调节

结论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢