虎杖中活性成分的提取与白藜芦醇的纯化及其抗氧化性研究

摘要

白藜芦醇广泛的存在于自然界中，目前已发现含白藜芦醇的植物72种，涵盖了21科、31属植物，其中大部分都是常见的植物，如虎杖、决明、藜芦、葡萄、花生、桑葚等。然而大多数的植物中白藜芦醇的含量都很低，只有虎杖与葡萄的含量较高，因此虎杖与葡萄成为提取白藜芦醇的主要原料，其中虎杖中白藜芦醇的含量最高，在干燥虎杖根茎中的含量可达1-4mg/g。中草药虎杖广泛分布于我国的华东、中南及辽宁、陕西、甘肃、四川、云南等地，自然资源丰富。
　　目前工业生产白藜芦醇仍以天然提取为主。虽然化学合成法已有不少成功例子，但是食用安全性较差。所以人们还是提倡从天然植物中提取。
　　白藜芦醇（resveratrol）能减轻多种因素造成的组织器官损伤，具有保护肝脏、降血脂及抗脂质过氧化等作用，可广泛应用于医药、保健品、食品添加剂和化妆品等领域，具有很大的开发应用价值。
　　虎杖中不仅含有白藜芦醇，还含有大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素-6-甲醚等多种活性成分，其中大黄素具有抗炎、抗病毒、及抗肿瘤等多种药理作用。大黄素是一种天然色素，具有多种生理活性，被广泛应用于医疗、保健品、日用化工品、护发护肤品中。大黄素还可作为轻泻剂，具有很高的药用价值。
　　本研究将白藜芦醇与大黄素同时提取，提取白藜芦醇的同时，可以得到大黄素的副产物，增加了实际生产的收益，节约了生产成本。通过比较回流、索式、超声提取几种提取方式的提取效果，确定采用超声提取。比较了乙醇、甲醇、丙酮、水、乙酸乙酯对虎杖中白藜芦醇与大黄素的提取效果。选择乙醇做为提取溶剂最好。分别考察了随着乙醇浓度、提取功率、料液比、提取时间各因素的变化白藜芦醇与大黄素提取率的变化趋势。从四个因素的的各个水平中选择三个水平按照L93(4)正交表进行正交实验。通过方差分析得出影响提取率的最显著影响因素，确定最佳提取条件为:80％乙醇、超声功率162W，料液比1∶50，提取时间20分钟。在最优实验条件下进行验证实验，确定提取次数为三次。
　　利用高效液相色谱仪的双波长检测功能，建立了高效液相色谱法(HPLC)同时检测反式白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素。线性方程分别为白藜芦醇苷Y=26.3693X+8.6429，r=0.9993;反式白藜芦醇Y=42.2737X+15.9866，r=0.9964;大黄素Y=11.3900X-38.5900，r=0.9922;线性范围均为1mg/L～20mg/L;检出限为0.7mg/L、0.8mg/L、0.75mg/L。
　　采用分子印迹技术以白黎芦醇为模板分子，选择丙烯酰胺作为白藜芦醇印迹聚合物的功能单体，氯仿和四氢呋喃的混合溶液作为印迹聚合物合成溶剂，制备了白黎芦醇分子印迹聚合物，考察了分子印迹聚合物的吸附性能、选择性能以及固相萃取性能。优化分子印迹固相萃取的萃取条件，选择30％(V/V)的乙醇-水溶液5mL作为上样溶液，选择40％(V/V)的乙醇-水溶液作为淋洗液、80％(V/V)的乙醇-水溶液作为洗脱液。比较了分子印迹与大孔吸附树脂对白藜芦醇的纯化效果，分子印迹法优于大孔吸附树脂法。
　　采用DPPH法测定白藜芦醇的抗氧化性。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 虎杖简介

1．2 虎杖的化学成分

1．2．1 虎杖中的芪类化合物

1．2．2 虎杖中的蒽醌类化合物

1．3 白藜芦醇与大黄素的生物学活性

1．3．1 白藜芦醇的生物学活性

1．3．2 大黄素的生物学活性

1．4 白藜芦醇的研究现状

1．4．1 白藜芦醇的提取现状

1．4．2 白藜芦醇的纯化现状

1．4．3 白藜芦醇的检测现状

1．5 大黄素的研究现状

1．5．1 大黄素的提取现状

1．5．2 大黄素的检测现状

1．6 应用价值

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 仪器与设备

2．1．2 试剂与材料

2．2 试验方法

2．2．1 虎杖中活性成分的检测方法

2．2．2 虎杖中活性成分的提取实验

2．2．3 虎杖中白藜芦醇的分离纯化

2．2．4 白藜芦醇分子的抗氧化性测定

3 结果与讨论

3．1 虎杖中活性成分的检测方法

3．1．1 色谱条件的确定

3．1．2 线性方程的确定

3．1．3 精密度实验

3．1．4 稳定性试验

3．1．5 回收率实验

3．1．6 样品含量测定

3．2 虎杖中活性成分的提取实验

3．2．1 提取方法的比较

3．2．2 提取剂的选择

3．2．3 单因素实验

3．2．4 正交实验

3．2．5 提取次数的确定

3．3 白藜芦醇的纯化

3．3．1 白藜芦醇分子印迹聚合物功能单体及溶剂的选择

3．3．2 白藜芦醇在分子印迹聚合物上的结合等温线及结合特性

3．3．3 白藜芦醇分子印迹固相萃取柱的制备及分离纯化条件优化

3．3．4 虎杖提取物的分离纯化

3．4 白藜芦醇的抗氧化能力

3．4．1 DPPH溶液的标准曲线

3．4．2 白藜芦醇的抗氧化能力

4 结论与展望

4．1 结论

4．2 展望

参考文献

作者简介

致谢