苹果树腐烂病拮抗菌株的分离、筛选和种类鉴定

摘要

苹果树腐烂病(AVC)是一种由Valsa mali引发的病害，其对中国苹果产业造成了严重的威胁。过去几十年化学杀菌剂被广泛应用于控制苹果树腐烂病。然而，常用的化学杀菌剂会危害环境健康和食品安全。生物防治在环境保护和农业生产中是一种环保和性价比高的绿色技术，它一般采用选定的生物资源，包括有益微生物。从山东省栖霞市的果园中采集的土样中分离了60株生防菌，并且在室内和室外测试了这些菌株对苹果树腐烂病的防治效果。菌株J5表现出最明显的拮抗活性，该菌株无致病性，结合形态学特征和16S rDNA基因序列分析鉴定其为解淀粉芽孢杆菌。主要结果如下:
　　1.从山东省栖霞市的一个果园中采集土样。从采集的土样中分离了60株生防菌，包括30株真菌，28株细菌和2株放线菌。
　　2.采用对峙培养法和滤纸纸片法检测60株菌株的拮抗作用，在平板对峙法中12株菌株的抑菌率超过60％。滤纸片法检测平板对峙法筛选出的12株菌株的抑制作用，12株菌株中有6株菌株抑菌率超过50％，这6株菌株:J1，J2，J5，J19，J20和J21的抑菌率分别是68.15％，58.89％，58.52％，63.33％,50.74％和69.63％。
　　3.在离体枝条上测试6株菌株对苹果树腐烂病的保护作用和治疗作用。
　　在保护作用测试中，当结合滤液和菌液共同作用在接种苹果树腐烂菌之前的伤口上时，菌株J5表现出最好的防治效果，保护效果达到94.72％，其和化学防治甲基硫菌灵处理防治效果相等。菌株J5的滤液对苹果树腐烂病具有较强的拮抗作用，防治效果为92.40％。然而，菌株J5的菌液单独作用时防治效果仅有31.82％。
　　在治疗作用的试验中，病斑被刮除后在伤口处滴加菌液、滤液以及菌液+滤液。菌株J5的菌液+滤液处理对苹果树腐烂病的防治效果最好，并且治疗防治效果能达到98.87％，其防治效果和化学防治甲基硫菌灵相当。单独用滤液的治疗防治效果是80.65％，然而单独用菌液的治疗防治效果仅仅是48.43％。
　　4.在田间试验中，6株菌株的防效被测试。结果表明菌株J5的滤液+菌液处理防治效果为42.53％，其是测试菌株中防治效果最好的菌株，尽管菌株J5仍然比化学药剂的防治效果低。
　　5.通过形态学观察和分子生物学鉴定，菌株J5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。

目录

声明

摘要

1．1．1 苹果树腐烂病的危害和症状

1．1．2 病原菌种类及其来源

1．1．3 苹果树腐烂病发生规律研究介绍

1．1．4 苹果树腐烂病发生的原因

1．1．5 苹果树腐烂病流行研究现状

1．2 苹果树腐烂病的综合防治措施

1．2．1 农业防治

1．2．2 化学防治

1．2．3 物理防治

1．2．4 生物防治

1．3 研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 供试培养基

2．1．2 供试菌株

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要试验仪器

2．1．5 供试枝条

2．2 试验方法

2．2．1 菌株的分离

2．2．2 平板对峙法初筛

2．2．3 菌株无菌培养滤液对苹果树腐烂病菌的抑制效果

2．2．4 在苹果病离体枝条测定拮抗菌株对腐烂病防治效果

2．2．5 田间试验测定拮抗菌株对苹果树腐烂病的保护防治效果

2．2．6 菌株鉴定

3．1 菌株分离

3．2 平板对峙法对拮抗菌株的初筛

3．3 无菌滤液法对拮抗菌株的复筛

3．4 在苹果离体枝条上测试拮抗菌株对腐烂病的防治效果

3．4．1 拮抗菌株对苹果树腐烂病离体枝条的保护防治效果

3．4．2 苹果离体枝条上拮抗菌株对腐烂病的治疗作用

3．5 田间试验

3．6 菌株J5的种类鉴定

3．6．1 形态特征

3．6．2 16S rDNA序列分析

3．6．3 特异性引物鉴定

4．1 土壤中分离生防菌

4．2 利用生防微生物防治苹果树腐烂病有广阔的应用前景

5 结论

参考文献

作者简介

致谢