a7nACh受体在孕期酒精暴露抑制新生大鼠RRDA中的作用

摘要

背景：酗酒是影响人类身体健康的因素之一，不仅有损个人身心健康，对家人和社会都会产生不良影响。尤其是女性孕期饮酒会严重影响胎儿的生长发育，严重者发生胎儿酒精综合征(fetal alcohol syndrome，FAS)，中枢神经系统失调便是其特征表现之一。基本节律性呼吸起源于延髓呼吸中枢，面神经后核内侧区是基本节律性呼吸产生的关键部位。稳定的节律性呼吸是机体存活的前提条件，中枢性呼吸系统疾病，尤其是延髓呼吸中枢部位的病变是临床工作中的常见病与多发病，而酗酒引起的子代呼吸中枢功能异常也越来越多见，因此，研究孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢功能的作用及其机制对相关疾病的预防和治疗有着广泛的应用前景和重要意义。 目的：使用电生理方法研究孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢基本节律性呼吸放电(rhythmic respiratory discharge activities，RRDA)、使用Westernblot和qRT-PCR检测α7nACh受体(α7 nicotinic acetylcholinergic receptor，α7nAChR)蛋白和基因表达的变化，探讨α7nAChR在孕期酒精暴露中所致子代呼吸抑制中的作用和机制，为临床预防和治疗提供思路和实验依据。 方法： Sprague-Dawley大鼠，随机分为对照组和实验组。对照组大鼠常规饲养;实验组大鼠除常规饲养外，自合笼前一个月起至哺乳期给予8％的酒精为唯一饮用水。使用2天的新生大鼠，雌雄不拘。 1.记录反映延髓呼吸中枢功能的脑片RRDA，观察α7nAChR激动剂乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)和拮抗剂银环蛇毒素(Alpha-bungarotoxin，α-BGT)对对照组和实验组RRDA的作用，以明确α7nAChR是否参与孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢的抑制作用。 2.采用Western Blot技术检测α7nAChR在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元上的表达，明确孕期酒精暴露是否下调α7nAChR在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元上的表达。 3.采用qRT-PCR技术检测α7nAChR mRNA在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元表达，明确孕期酒精暴露是否下调α7nAChR mRNA在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元上的表达。 结果： 1.对照组和实验组脑片放电60min内稳定无衰减，实验模型稳定可靠。实验组脑片放电弱于对照组(以对照组为100％，实验组20min时TI87.67±3.28％、IA90.57±4.81％、RC89.93±4.42％);α7nAChR激动剂ACh对实验组和对照组脑片放电都有兴奋作用，对照组兴奋效果强于实验组（实验组变化率分别为10.33±0.58％、9.69±0.48％、9.19±0.71％;对照组为:18.33±0.60％、17.55±0.45％、19.56±0.63％);α7nAChR拮抗剂a-BGT对实验组和对照组脑片放电都有抑制作用，对照组抑制效果强于实验组（实验组变化率分别为11.87±0.49％、14.64±0.69％、10.69±0.48％;对照组为:14.64±0.65％、16.89±0.53％、15.56±0.64％);α7nAChR参与孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢的抑制作用。 2.Western Blot实验结果显示，实验组α7nAChR在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元表达水平下调(对照组1.012±0.090、实验组0.682±0.034)。 3 qRT-PCR实验结果显示，实验组α7nAChR mRNA在延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元表达水平下调(对照组1.004±0.101、实验组0.716±0.047)。 结论： 1.孕期酒精暴露抑制新生大鼠延髓脑片RRDA、抑制延髓呼吸功能。 2.通过下调α7nAChR和受体mRNA表达而降低α7nACh对RRRDA的调节作用可能是孕期酒精暴露抑制子代延髓中枢呼吸功能的机制之一。

目录

声明

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 实验结果

2．1 神经电生理

2．2 酒精暴露组α 7nAChR蛋白表达低于对照组

2．3 酒精暴露组α 7nAChR mRNA表达低于对照组

3．讨论

3．1 离体脑片标本的应用

3．2 α 7nAChR在孕期酒精暴露所致新生大鼠延髓脑片RRDA抑制中的作用

3．3 孕期酒精暴露通过α 7烟碱型乙酰胆碱受体抑制新生大鼠延髓呼吸中枢的可能机制

4．小结

参考文献

α 7烟碱型乙酰胆碱受体的生理功能及相关疾病

英文缩略词

攻读学位期间发表文章情况

致谢

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