青霉素G酰基转移酶工艺过程研究

摘要

阿莫西林是目前应用较广泛的β-内酰胺类抗生素之一。由于反应条件温和、污染少、转化率高等特点，酶法生产阿英西林成了人们争相研究的热点。在酶法工艺中，青霉素酰基转移酶是关键的催化用酶，因此，研究该酶的分离、纯化具有一定的理论和现实意义。本文主要对青霉素酰基转移酶的分离、纯化、固定化步骤进行了研究。
　　 首先，通过对青霉素G酰基转移酶细胞破碎的方法研究，本文得到最佳方法为均质破碎，其中均质的最佳条件为:均质压力850bar，收率达到93.94％，比活为1.87U/mg。
　　 其次，通过对熟处理工艺中时间和温度的摸索实验，本文得到热处理的最佳时间为60min，最佳温度为45℃。在硫酸铵沉淀工艺研究中，本文确定了硫酸铵沉淀的最佳饱和度为70％。
　　 再次，通过对比进口和国产两种层析树脂，进口树脂层析平均收率为91.86％，国产树脂层析平均收率为89.42％，本文选择进口树脂进行层析。
　　 最后，通过粒径、投酶比、盐浓度的对比，本文确定酶固定化时选用天津南开的ESR树脂，固定化过程中适宜的投酶比为60 U/g，适宜的盐浓度为1 mol/L。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 抗生素

1．1．1 抗生素的种类

1．1．2 抗生素的作用机理

1．2 阿莫西林

1．3 青霉素G酰基转移酶

1．3．1 概述

1．3．2 酶的传统分离纯化方法

1．3．3 固定化树脂

1．4 课题研究内容及意义

第2章 实验方法与过程

2．1 工艺流程图

2．2 实验准备

2．2．1 实验原材料

2．2．1 实验仪器

2．3 实验过程

2．3．1 酶活的测定

2．3．2 蛋白质含量的测定

2．3．3 缓冲液的配制

2．3．4 发酵液细胞破碎

2．3．5 发酵液纯化

2．3．6 酶液层析

2．3．7 固定化

2．3．8 结果计算方法

第3章 实验结果与分析

3．1 细胞破碎方法

3．1．1 均质方法

3．1．2 渗透方法

3．1．3 超声波破碎法

3．1．4 细胞破壁方法的比较

3．2 酶溶液的纯化

3．2．1 酶溶液的热处理

3．2．2 酶溶液的沉淀

3．3 层析试验结果

3．4 固定化实验结果

3．4．1 树脂的选择

3．4．2 投酶比的选择

3．4．3 固定化盐浓度试验

结论

参考文献

攻读硕士学位期间所发表的论文及专利

致谢

个人简历