链霉菌(Streptomyces SP103)发酵液抗菌活性的物质基础研究

摘要

植物内生真菌由于长期与宿主共处，有可能产生与宿主相同或相似的活性物质，也可能产生有利于增强宿主抵抗力的活性物质。本文以黄山采集来的千层塔为原料，进行了内生真菌的分离、活性菌株的筛选并探讨了其生物活性的物质基础。主要研究内容及结果如下：
　　 ⑴从千层塔中分离到87株内生真菌，其中67株菌株的发酵液对四种病原真菌（苹果轮纹、苹果炭疽、小麦赤枯、油菜菌核）有抑制作用，其中，对小麦赤枯、苹果轮纹、苹果炭疽和油菜菌核具有抑制作用的菌株所占的比例分别为：42.5％、40.2％、60.9％和57.5％。
　　 ⑵选取活性较好的菌株Streptomyces SP103，用发酵罐发酵，将发酵液离心，分为发酵液和菌丝体，采用生长速率法测定了其对病原真菌的相对抑制率。发酵液对苹果轮纹和油菜菌核的相对抑制率最好，几乎看不到菌丝生长，其相对抑制率为100％；对苹果炭疽和小麦赤枯的相对抑制率也分别为83.4％和81.3％。
　　 ⑶采用柱层析、薄层层析等分离手段对Streptomyces SP103发酵产物的不同部位进行分离，并追踪各部分的生物活性，活性部位主要为80％乙醇部分和乙酸乙酯萃取部分（C3和D3）。
　　 ⑷通过硅胶柱层析、薄层层析、凝胶（Sephadex LH-20）层析等方法，从发酵液中分离到了3个化合物，通过1HNMR、GC-MS等光谱技术鉴定了其中的3种化合物，分别为苯甲酸苄酯、山萘酚、7H-6，9a-Methano-4H-cyclopenta[9，10]cyclopropa[5，6]cycl-odeca[1，2-d]-1，3-dioxin-13-one，6，6a，7a，8，9，12，12a，12b-octahydro-12，12a-dihydroxy-2，2，7，7，9，11-hexamethyl-，[6R-（6.alpha.，6a.alpha.，7a. alpha.，9.alpha.，9a.alpha.，12.beta.，12a.beta.，12b.alpha.）]。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

第一章内生真菌综述

1.1内生真菌研究进展

1.2内生菌药用活性物质

1.2.1抗肿瘤物质类

1.2.2抗生素类

1.2.3毒性物质类

1.2.4抗糖尿病物质类

1.2.5植物生长调节物质类

1.2.6活性酶类

1.2.7抗氧化活性类

1.3链霉菌代谢产物研究进展

1.4千层塔简介

1.5立题依据

参考文献

第二章链霉菌Streptomyces SP103的分离、筛选

2.1材料和方法

2.1.1材料和仪器

2.1.2常用培养基的配制

2.1.3方法

2.2实验结果与讨论

参考文献

第三章链霉菌Streptomyces SP103的发酵液活性初步研究

3.1材料和仪器

3.2方法

3.2.1常用培养基的配制

3.2.2发酵时间不同的发酵液的活性检测

3.2.3 Streptomyces SP103的培养

3.2.4抑制植物病原真菌活性的检测

3.3结果与讨论

第四章链霉菌Streptomyces SP103发酵产物抗菌活性部分筛选

4.1材料、试剂和仪器

4.2方法

4.2.1常用培养基的配制

4.2.2 Streptomyces SP103的培养

4.2.3抑制植物病原真菌活性的检测

4.2.4发酵产物中活性物质的分离提取

4.2.5碘化铋钾显色

4.3实验结果

4.3.1对小麦赤霉的抑制作用

4.3.2对苹果轮纹的抑制作用

4.3.3对油菜菌核的抑制作用

4.3.4对苹果炭疽的抑制作用

4.3.5碘化铋钾喷雾显色结果

4.4讨论

第五章链霉菌Streptomyces SP103发酵产物次生代谢产物的分离与鉴定

5.1材料和方法

5.1.1仪器与试剂

5.1.2发酵条件

5.1.3分离纯化方法

5.1.4抗病原真菌的检测方法

5.2菌株的发酵

5.3发酵液活性物质的提取

5.3.1有机溶剂萃取提取

5.3.2各部分的分离流程

5.4化合物的鉴定

5.4.1化合物Ⅰ

5.4.2化合物Ⅱ

5.4.3化合物Ⅲ

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢