松萝酸和白藜芦醇产生菌的分离筛选

摘要

当今世界，心脑血管疾病、癌症以及由各种真菌引起的疾病极大地威胁着人类的健康，药物滥用导致了许多致病菌的耐药性增强，而药物来源的局限也限制了新药的诞生，所以人类寻找更多的新型、有效药物已迫在眉睫。
　　松萝酸是在松萝地衣体中发现的一种羧酸类物质，具有抗菌、抗病毒、植物生长抑制剂等活性。白藜芦醇和白藜芦醇苷是一种非黄酮类多酚化合物，具有抗癌、抗肿瘤、保护心血管系统等的活性。松萝酸和白藜芦醇的生物学活性为人类开发新一代药物及保健品提供可能。
　　本研究主要是对从云南省采集的松萝地衣体和虎杖植物样品中进行植物内生真菌的分离和保藏，初步建立了松萝酸和白藜芦醇、白藜芦醇苷的筛选方法。
　　首先，将采集后保藏的松萝地衣样品进行表面消毒处理，采用 PDA和 MEA培养基进行内生真菌的分离和培养，共分离得到内生真菌151株。采用马铃薯汁液作为基础发酵培养基，进行内生真菌的发酵后，对其发酵液进行粗提取，采用薄层层析初筛得到松萝酸产生真菌70株，通过分析型高效液相色谱仪筛选出松萝酸产生真菌61株，其中菌株06504发酵产生的松萝酸产量最高，达到2.977mg/mL。选取其中液相色谱峰峰型较好和相对高产的5株内生真菌，对其进行发酵以及发酵液的粗提和液相质谱联用分析，结果表明5个样品中均含有与松萝酸相对分子量相同的物质存在。同时本研究还对菌株06504最佳发酵周期和发酵后的松萝酸积累部位进行了确定，结果显示菌株06504的最佳发酵周期为6天，发酵后的松萝酸积累于细胞外的发酵液中。
　　其次，将采集后保藏的虎杖植物样品进行表面消毒后，分别采用PDA和查氏培养基对其进行植物内生真菌的分离和培养，共分离得到植物内生真菌65株。以马铃薯汁液作为基础发酵培养基，分别对65株内生真菌进行发酵以及发酵液粗提，由于白藜芦醇稳定性比较弱，见光易分解，因此本研究直接采用分析型高效液相色谱仪对白藜芦醇和白藜芦醇苷进行筛选和含量的测定。共计筛选得到产白藜芦醇的植物内生真菌12株，其中发酵菌株06720产生的白藜芦醇产量最高，达到1.440mg/mL；筛选得到产白藜芦醇苷的植物内生真菌13株，其中发酵菌株06733产生的白藜芦醇苷产量最高，达到0.300 mg/mL。同时本研究还对菌株06720、06733的最佳发酵周期以及其发酵后积累部位进行了确定，结果显示菌株06720的最佳发酵周期为7天，菌株06733的最佳发酵周期为120h，发酵后的白藜芦醇、白藜芦醇苷均积累于细胞外的发酵液中。

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第1章 绪论

1.1 植物内生真菌简介

1.2 从植物内生真菌中发现的新活性化合物的种类

1.3 松萝属地衣体

1.4 虎杖

1.5 活性物质的鉴定方法简介

1.6 研究意义与目的

1.7 本文研究的主要内容

第2章 松萝地衣体和虎杖内生真菌的分离、纯化及保藏

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果菌体

第3章 松萝酸产生菌的筛选

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

第4章 白藜芦醇产生菌的筛选

4.1 实验材料及仪器

4.2 实验方法

4.3 实验结果

总 结

第5章 结论

参考文献

致 谢

攻读学位期间取得的科研成果

作者简历