枯草芽孢杆菌VJ抗真菌物质生物学特性及液体发酵优化研究

摘要

本文研究了具有抗菌作用的枯草芽孢杆菌V1J菌株产生抗菌物质的条件和抗菌物质的活性。结果表明，BPY培养基为V1J的最适种子培养基，该种子培养基产生的菌量高，菌体健壮，最适菌龄为20h。SDAY培养基为产抗菌物质活性最高的培养基，36h开始产生抗菌物质，84h抗菌物质活性达到最大值。改良基础培养基由于成分简单，且活性较高而用于发酵条件的优化研究。V1J菌株产生抗菌物质的最适发酵条件为：30℃，100ml/250ml的装液量，发酵初始PH6.5，接种量为13％，0.1～0.3％的NaCl含量。Al3+，Zn2+，Mg2+，Mn2+对抗菌物质的活性有一定的促进作用。Ag+，Hg2+，Fe2+，Cu2+对抗菌物质的产生和菌的生长起抑制作用；pb2+在低于0.05mmol/L的浓度下对于抗菌活性有一定促进作用。低浓度的表面活性剂Tween80对V1J发酵有促进作用。　　抗菌谱的研究表明，V1J产生的抗菌物质具有广谱抗菌活性，对多种丝状真菌，酵母具有拮抗作用，对于部分革兰氏阳性菌和阴性菌也有抑制作用。　　对抗菌物质的研究表明，该抗菌物质对酸碱比较稳定，最适作用pH值为6-8。在65℃以下抗菌物质比较稳定，而在85℃时抗菌物质活性全失。胃蛋白酶，胰蛋白酶，溶菌酶，果胶酶，纤维素酶处理对抗菌物质的活性影响不大。草酸，EDTA，Tween80和氯仿对抗菌物质略有影响，而甲醇，乙醇，三氯乙酸，苯酚，二甲苯，丙酮，脲，十二烷基磺酸钠和TritonX-100对抗菌物质几乎没有影响。紫外光对抗菌物质有一定影响，可见光对抗菌物质几乎没有影响。抗菌物质的最适作用pH为7.0。　　最佳萃取有机溶剂的筛选：表明萃取效果最好的有机溶剂是正丁醇。利用酸化的处理方法获得粗提物，通过梯度实验确定其最适酸化PH为3.5。有机溶剂对粗提物的选择性溶解效果最好的是乙腈，而80％的甲醇溶解选择性较好。醇提物旋转蒸发，制得黄色粉末，经检测发现lmg/ml的醇提物水溶液中蛋白质含量约4.9508ug/ml，抑菌圈检测发现其含量与抑菌圈大小呈正相关。

目录

文摘

英文文摘

前言

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试菌株

1.1.2主要仪器与药品

1.1.3培养基

1.2实验方法

1.2.1菌种的活化

1.2.2 V1J发酵原液的制备和无菌液的制备

1.2.3 V1J抗菌活性的测定

1.2.4 V1J细胞标准曲线的绘制

1.2.5蛋白质浓度标准曲线的绘制和蛋白质浓度的测定

1.2.6最适种子培养基的筛选

1.2.10抗菌谱的检测

1.2.11抗菌物质的生物学特性研究

1.2.12 V1J抗菌物质的分离提纯

2结果与分析

2.5 V1J菌龄对发酵液抗菌活性的影响

2.6 V1J菌株抗菌物质最佳发酵条件的研究

2.6.1培养时间对V1J菌株抗菌物质产生的影响

2.6.2培养温度对V1J发酵液抑菌活性的影响

2.6.3接种量对V1J抗菌活性的影响

2.6.4装液量对V1J抗菌活性的影响

2.6.5初始PH对V1J抗菌活性的影响

2.6.6 NaCl含量对V1J生长和抗菌活性的影响

2.6.7碳源对V1J抗菌物质形成的影响

2.6.8氮源对V1J抗菌物质形成的影响

2.6.9金属离子对V1J菌株的发酵产生抗菌物质的影响

2.7表面活性剂对V1J的发酵产生抗菌物质的影响

2.8抗菌谱的测定

2.9抗菌物质的生物学特性

2.9.1 PH对抗菌物质的影响

2.9.2温度对抗菌物质的影响

2.9.3存放时间对抗菌物质的影响

2.9.4酶对抗菌物质的影响

2.9.5化学试剂对抗菌物质的影响

2.9.6可见光和紫外光对抗菌物质的

2.9.7抗菌物质最适作用PH范围

2.9.8透析膜对抗菌物质的滤过作用

2.10 V1J抗菌物质的分离提纯

2.10.1最佳萃取有机溶剂的筛选

2.10.2粗提物的提取和最适酸化PH的确定

2.10.3抗菌物质有机提取液的选取

2.10.4抗菌物质的进一步纯化和蛋白质含量的检测

3小结与讨论

致谢

参考文献

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