禽多杀性巴氏杆菌质粒pC48-1和pX73序列测定与分析

摘要

本试验从两株禽源多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida，Pm)菌株C48-1和X73中提取和纯化了内源性质粒，采用酶切克隆和引物步行测序策略测定了它们的基因全序列，其中pC48-1序列全长为2621bp，pX73序列全长为4220bp。 质粒pC48-1和pX73的平均G+C含量分别为41.6％和42.8％，在整个序列中的分布都比较集中。pC48-1上存在6个正向重复序列和6个反向重复序列，pX73上存在6个正向重复序列和12个反向重复序列，其长度都超过10bp。在质粒pC48-1的两条链上共发现有6个开放阅读框(ORF)，质粒pX73的两条链上共发现有19个开放阅读框，大多数阅读框之间有相互交迭的现象。质粒pC48-1和pX73的开放阅读框在密码子的使用上没有明显的GC偏向性，但编码区GC含量较质粒整个序列的GC含量明显增加，其编码区GC含量分别为49.66％和46.96％。 pC48-1上存在Acc65Ⅰ、BamHⅠ、BclⅠ、HindⅢ、KpnⅠ、NheⅠ、ScaⅠ、StuⅠ和XbaⅠ共9个单酶切位点，在质粒pX73上存在AceⅢ、ClaⅠ、HincⅡ、M.HindⅡ、NheⅠ和StuⅠ共6个单酶切位点。 同源性分析发现，与质粒pC48-1和pX73核苷酸序列同源性很高的序列分别有15和14个，且都与多杀性巴氏杆菌P1059菌株质粒pLEM核苷酸序列高度同源。pC48-1的6个推测ORF中，有5个ORF编码的氨基酸序列与其他蛋白质有不同程度的同源性，其中ORF2和ORF4编码的氨基酸序列与多杀性巴氏杆菌质粒pLEM的转运蛋白都有100％的同源性。pX73的19个推测ORF中，有13个ORF编码的氨基酸序列与其它蛋白质有不同程度的同源性，其中ORF7、ORF9、ORF13、ORF14、ORF15、ORF16、ORF17和ORF18编码的氨基酸序列与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌等的转移蛋白A或B有90％以上的同源性。 因此，本研究工作通过两株禽源Pm质粒的基因全序列测定和分析，对将Pm质粒构建成分子克隆载体，进一步深入Pm分子生物学研究、探索制备安全有效的Pm基因工程菌苗具有重要的理论意义。

目录

前言

研究内容：1材料与方法

研究内容：2结果与分析

研究内容：3讨论

研究内容：4小结与创新点

致谢

参考文献

文献综述

附录

图版

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明