11株禽多杀性巴氏杆菌OmpA基因克隆测序及其序列分析

摘要

本研究对不同宿主来源的11个禽Pm分离株和3个荚膜型参考株(A,B,D)OmpA基因进行了克隆测序，并与GenBank中登陆菌株序列进行遗传进化分析，为今后开展OmpA基因表达及其相关免疫原性分析奠定基础。11个禽Pm菌株和3个荚膜参考株株的扩增产物电泳结果均出现一条1.2kb的条带，与预期结果相符。随机挑选白色菌落的阳性克隆进行培养，提取质粒，BamHI , SalI双酶切，可见2.6kb与1.2kb的条带，与理论结果一致，证明重组质粒构建成功。序列测定发现，14个菌株的。mpA基因大的开放阅读框在1047-1077bp之间。14个Pm菌株的信号肤均为N端21个氨基酸残基;成熟蛋白氨基酸残基数量在327332之间，推测的分子量在35.1936.35ku之间，高变区位置有4个，4660位、93-106位、145167位以及198210位，与B细胞抗原表位预测的结果相一致。26个Pm菌株之间同源性在85.3%-100%之间;其中C48-1,1010,9003,890920,921012.CVCC390,xj等7个菌株OmpA序列同源性为100%;P1059与CU同源性100%;CVCC393与Yak同源性100%;121-3与36950菌株同源性100%。遗传进化树分析显示，国内6个禽Pm菌株、国际标准株X73以及荚膜A型参考菌株CVCC390在同一分支上，美国4个火鸡分离株在另一分支;CVCC391,CVCC393,P52,yak,7022B等B型、E型牛分离株在同一分支，36950,121-3,xj149,P70，xinky-l0-l,xinky-12等牛、绵羊的A型分离株在同一分支。