食品中土霉素、四环素比色检测方法研究

摘要

四环素类抗生素是一类由放线菌产生的广谱抗生素，其价格便宜，抗菌效果好，被广泛的应用于畜牧养殖行业。近年来，由于商业利益的驱使，四环素类抗生素的在养殖业的使用量不断增大，出现了很多不合理的滥用情况。过量的四环素会残留在动源性食品之中，随食物链进入人体，严重威胁人类健康。本文选择土霉素和四环素作为目标，建立了一种比色检测四环素类抗生素的方法。具体研究内容如下：
　　基于氯化血红素对土霉素的检测方法的建立。本文选择在磷酸氢二钠缓冲液中具有辣根过氧化物酶活性的氯化血红素（ Hemin）溶液作为检测体系，以3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）和双氧水（H2O2）为催化底物，通过生成产物的颜色变化，建立了一种新的土霉素（OTC）的比色检测方法。本文对实验的各个相关因素进行了优化。最优实验条件下，在浓度25-90 nM的范围内，ΔA450与OTC浓度呈良好的线性关系，线性回归方程为：y=1.04×10-3 C+0.0622，最低检测限度为21.89 nM，通过牛奶样品的加标回收实验得知，添加回收率范围在90%-108%之间，相对标准偏差在1.39%-4.02%之间。
　　基于氯化血红素对四环素的检测方法的建立。本文利用 Hemin催化特性，采用与上述土霉素检测相似的原理对四环素（TET）进行了分析检测。在浓度35-90 nM的范围内，不同浓度TET与空白样品在450nm处吸光值的差值ΔA450与 TET浓度呈良好的线性关系，对其进行线性拟合，回归方程为：y=1.44×10-3 C+0.0811。由公式3σ/s计算出最低检测限度为15.81 nM，该方法具有良好的特异性，通过实际样品回收实验得知，各个浓度的平均回收率在92%-106%，相对标准偏差在0.93%-6.58%。
　　基于功能性DNA增强氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法的建立。利用高特异性单链 DNA(G-ssDNA)能够增强 Hemin催化活性的特点，在上述检测方法基础上进行改进，建立了一种快速检测食品中四环素的方法。对影响体系催化活性的各个因素进行了优化，根据工作曲线，在四环素浓度为10 nM-100 nM处进行线性拟合，所得回归方程为y=4×10-3 C+0.105。该方法最低检测限度(LOD)为5.69 nM，与硫酸链霉素、双氯芬酸钠、卡马西平、阿莫西林、硫酸卡那霉素、青霉素钾等类似物反应测试，无明显交叉反应，牛奶样品检测回收率为92%-99%，具有良好的准确性和特异性。
　　本文建立的土霉素和四环素检测方法，具有良好的准确性和特异性，操作简单，检测结果肉眼可辨。不需要依赖大型仪器和设备就可以实现对目标的特异性检测。

目录

第一章：绪 论

1.1四环素类抗生素的简介

1.2国内外四环素类抗生素的污染现状

1.3 四环素类抗生素的危害

1.4食品中四环素类抗生素的限量标准

1.5四环素类抗生素残留的常用检测方法

1.6氯化血红素与DNA-G四联体研究简介

1.7本课题研究内容与意义

第二章 基于氯化血红素检测的土霉素研究

2.1引言

2.2材料与方法

2.3实验原理和方法

2.4结果与讨论

2.5本章小结

第三章 基于氯化血红素的四环素检测研究

3.1引言

3.2材料与方法

3.3实验原理和方法

3.4结果与讨论

3.5本章小结

第四章 基于G-ssDNA增强氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法研究

4.1引言

4.2材料与方法

4.3实验方法

4.4结果与讨论

4.5本章小结

第五章 结论与展望

5.1结论

5.2展望

致谢

参考文献

附录

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