HIV/AIDS脾肺两虚证患者尿液代谢组学研究

摘要

目的：运用代谢组学方法,采用核磁共振技术对 HIV/AIDS 肺脾气虚证及健康人尿液进行代谢组学检测。通过样本分析比较艾滋病肺脾气虚证与健康人在代谢产物成分上的差异性和特异性,并建立和完善代谢组学方法对中医证候的研究的方法体系。
　　方法：以 HIV/AIDS 肺脾气虚证患者为研究对象,以同地区同年龄段的健康人为对照,共纳入研究对象44名,其中脾肺两虚证患者24例,健康组：当地健康人20例。分别采集病人及健康人尿液作为研究样品,应用 AVANCE 300MHz型超导傅立叶变换核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)谱仪,在室温条件下,在BRUKER Avance 300超导核磁共振波谱仪上调用相关脉冲序列,采用抑制水峰,设定饱和时间 2s、混合时间 0.15s、谱宽 6000Hz、采样点数 64K、累加次数 128次、采用中心频率都在水峰位置。将自由感应衰减(freein duction decay,FID)信号经傅立叶变换转为一维 NMR 谱图。根据内标设定参考峰的位置,调用MestReNova软件程序,经过谱图处理, 基线校正等数据归一化处理后,进行分段积分以0.04ppm为间隔,积分范围0.04~10.00ppm (扣除4.2-6.0ppm,此处为水和尿素的峰)进行分段积分,然后以最大峰面积为标准进行归一化处理直接将分段积分的数值以文本文件或Excel文件贮存。然后通过PLS-DA分析软件分析后,筛选出差异性的变量。并检索代谢组学相关 1H NMR 化学位移谱库(HMDB),并同时参考文献,对研究对象尿液中的部分成分化合物进行解析,运用综合方法进行相关性分析,从而研究HIV/AIDS脾气虚弱证相关物质基础。
　　结果：(1)核磁共振技术检测的 HIV/AIDS 肺脾气虚证患者与健康人尿液代谢物通过 PLS-DA 分析后,代谢物轮廓可以分开。(2)两组间差异性的变量约 20个大概推测为以下物质：甘氨酰-L-亮氨酸、L-缬氨酸、α-氨基丁酸、甲基丁二酸、丙酰甘氨酸、L-正亮氨酸、2- 羟基-3-甲基苯甲酸、3- 羟基丁酸、乙酰丙酸、肌苷、肌氨酸、半乳糖、脱氧核苷酸、5 - 羟基-L-色氨酸、喹啉酸、鸟苷、次黄嘌呤、甲基烟酰胺等。
　　结论：运用代谢组学的分析方法可以将艾滋病病人肺脾气虚证和健康人尿液代谢轮廓进行良好的区分。部分可能存在的潜在特征性标志物有助于艾滋病临床诊断,对其量化分析有一定的作用,代谢组学的检测方法有望成为诊断及判别艾滋病中医证型的新手段,对艾滋病的中医证候诊断的量化和客观化有一定的意义。

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中文摘要

英文摘要

第一章 前 言

第二章 实验部分

1研究对象和纳入排除标准

2材料和方法

结果

1 主成分分析

2聚类分析结果

讨论

1理论探讨

2结果的分析

结论

致谢

参考文献

附录1：

附录2：文献综述

附录3