从麦门冬汤对人血管内皮细胞因子的影响探讨硬皮病治疗中“肺主皮毛”的血管机制

摘要

目的：硬皮病即系统性硬化病（systemic sclerosis，SSc）属于中医“皮痹”范畴，中医学认为“肺主皮毛”，治肺代表方“麦门冬汤”在治疗硬皮病的过程中的机制值得探讨。现代医学认为SSc发病机制主要有血管异常、胶原异常及自身免疫异常三种假说。其中血管异常是最常见和最容易引起关注的病理改变，小动脉和微血管的异常发生在系统性硬化的始动阶段。目前多项研究显示，血管张力的控制受神经肽、血管内皮和血小板三方面的因素调节，而系统性硬化患者血管早期损伤和血小板活化等因素，导致血管活性物质的异常释放，引起神经-内皮等调控异常，造成血管痉挛。这也是雷诺现象发生的主要机制之一。Takhashi等认为，内皮细胞损伤常伴有内皮细胞的功能障碍。内皮细胞是人体一大分泌腺体，可分泌并释放多种血管活性物质，例如细胞粘附分子-1（VCAM-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、P选择素（P-selectin）、NO等。内皮损伤、功能障碍，势必导致内皮内分泌功能失调，常表现为缩血管物质如内皮素-1（ET-1）增加和舒血管物质如NO降低。其中VCAM-1、ICAM-1、P-selectin主要介导炎症与免疫应答，内皮素-1（ET-1）、NO则直接影响血管的收缩。所以通过体外培养人脐静脉内皮细胞，观察用药前后 VCAM-1、ICAM-1、内皮素、P选择素、NO等指标的变化，为麦门冬汤治疗硬皮病和中医“肺主皮毛”理论提供现代医学支持。
　　方法：将60只清洁级SD大鼠随机分为实验组、对照组、空白对照组，每组20只。实验组分别用麦门冬汤灌胃（麦门冬汤4.24g/100g/d，每日1次灌胃，共一周）和当归四逆汤灌胃，（当归四逆汤2.44g/100g/d，每日1次灌胃，共一周）空白对照组按实验组剂量给予同体积生理盐水灌胃一周。3组大鼠末次给药6h后腹主动脉取血，离心取上清，经灭活处理，无菌过滤器过滤、分装，-70℃保存备用。将提取的含药血清用完全培养基分别稀释为5％、10%、20%含药血清的低、中、高组，另加入薄芝糖肽组作为西药组与中药组进行对比。用MTT法检测含药血清对内皮细胞增殖的影响，用elisa法检测含药血清对内皮细胞分泌ET-1的影响，用硝酸根还原法检测含药血清对NO的影响，用流式细胞技术检测含药血清对内皮细胞分泌P-selectin、VCAM-1、ICAM-1的影响。
　　结果：（1）20%的麦门冬汤作用人血管内皮细胞24h时抑制率最高。
　　（2）麦门冬汤组的内皮素-1虽较生理盐水组有升高但却可以明显使NO升高，一定程度上拮抗了内皮素-1的收缩血管作用，减少对血管损伤。
　　（3）麦门冬汤组P-selectin和VCAM-1较生理盐水组明显降低，但ICAM-1却反而呈升高趋势。
　　结论：麦门冬汤可以降低血管内皮细胞P-selectin和VCAM-1的表达，使NO表达升高，一定程度上拮抗了内皮素-1的血管收缩作用，减少血管损伤，从而发挥对SSc的防治作用。

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材料和方法

结果与分析

理论与探讨

结论

致谢

参考文献

附录1 VCAM-1、ICAM-1、P-选择素流式图

附录2 文献综述: “肺主皮毛”的理论在治疗硬皮病中的理论研究

附录3 在校期间发表的文章