麦门冬汤治疗 SSc 过程中肺主皮毛的免疫机制研究

摘要

目的：系统性硬化症( systemic scLerosis,SSc)的发病和肺脏与免疫功能密切相关。本研究通过观察麦门冬汤的治疗作用及其对博来霉素所致 BALB/C 硬皮病小鼠 CD4+T、CD8+T 细胞、巨噬细胞的活化等影响；对抑制胶原产生的细胞 IL-10、TNF-γ的影响；对导致成纤维细胞活化生长的细胞因子 TGF-β、CTGF、PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α等的影响；对免疫器官胸腺、脾脏的影响；对皮肤和肺脏的病理学改变、皮肤胶原含量、羟脯氨酸检测及皮肤和肺组织中 TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 表达的影响,探讨麦门冬汤在治疗 SSc 过程中对“卫气(免疫功能)”与“肺和皮毛”的作用及其机理。
　　方法：硬皮病小鼠模型建立后,随机将 60 只小鼠分为模型组、麦门冬高、中、低剂量组,并设正常对照组即正常对照组。治疗三周后采集标本,用流式细胞仪检测小鼠外周血中 CD+4 T 细胞、CD+8 T 细胞的含量；用 ELISA 法检测血清 IL-10、TNF-γ、TGF-β、CTGF、 PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α及肺组织中 TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 的含量；用台盼蓝染色法计算小鼠巨噬细胞的活力；切取小鼠背部注射区皮肤及肺部组织,切成 2 块,1 块固定 10 %甲醛液,石蜡包埋用于苏木素-伊红(HE)染色和 Masson 染色,另 1 块匀浆备用,用以测定单位皮肤及肺组织中羟脯氨酸的含量；取胸腺、脾脏,计算其脏器指数；数据皆采用 SPSS18.0统计分析软件包分别求得各组的数据均值和标准差(χ±S ),做 t 检验。
　　结果：( 1)麦门冬汤能降低模型组小鼠的胸腺指数( P<0.01)；提高腹腔巨噬细胞活力( P<0.01)；提高模型组小鼠CD4+T、CD8+T的含量(P<0.01)；( 2)麦门冬汤能降低模型组小鼠皮肤厚度、肺纤维化指数及羟脯氨酸的含量(P<0.01)；( 3)麦门冬汤能降低模型组小鼠外周血中IL-10、TNF-γ、TGF-β、CTGF、PDGF、TNF-α、IL-4、IL-6的含量( P<0.01)；( 4)麦门冬汤能降低模型组小鼠皮肤中CTGF、PDGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量( P<0.01)；( 5)麦门冬汤能降低模型组小鼠肺中CTGF、PDGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量(P<0.01)。
　　结论：( 1)SSc 的成因中医学认为是腠理不密,肺失宣降为内因,外邪侵袭是诱发因素。“卫外不固,肺失宣降”是 SSc 发生的重要环节,恢复卫气及肺的功能发挥着举足轻重的作用；通过该实验提示治疗肺痿的代表方——麦门冬汤可以调节小鼠的免疫功能,并对 SSc 具有一定的治疗作用。( 2)麦门冬汤对小鼠 SSc 有良好的治疗效果。( 3)麦门冬汤对小鼠 SSc 具有量效关系。(4)麦门冬汤治疗 SSc 的机制可能与提高硬皮病模型小鼠腹腔巨噬细胞的活力, CD+4T、CD+8T 的含量；降低皮肤的厚度、羟脯氨酸的含量、皮肤和肺脏的纤维化指数、TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 的含量及外周血 IL-10、干扰素-γ、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α的含量有关。

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前言

材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验药品

1.3 实验试剂

1.4 实验仪器

1.5 其他材料

2 实验方法

2.1 分组与饲养

2.2 造模方法及用药

2.3 取材及检测方法

3 统计学处理

结果与分析

1 采用单因素方差分析

1.1 各组小鼠胸腺指数、脾脏指数及巨噬细胞活力的比较

1.2 各组小鼠外周血中 CD4+T、CD8+T 的表达

1.3 各组小鼠皮肤厚度及纤维化指数

1.4 各组小鼠肺组织中 CTGF、PDGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量

1.5 各组小鼠皮肤组织中 CTGF、IL-10、PDGF、TGF-β、TNF-α的含量

1.6 各组小鼠外周血中 IL-10、TNF-γ、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α的含量

1.7 各组小鼠皮肤中羟脯氨酸及胶原的含量比较表

1.8 各组小鼠肺组织的纤维化指数比较

2 各组小鼠病理学观察结果

2.1 HE 染色

2.2 MASSON 染色图片用细胞免疫组织化学定量分析系统测定皮肤的纤维化指数。

理论探讨

1 导师组以肺治皮治疗硬皮病的思路

1.1 遵循整体观念

1.2 免疫异常与 SSc 的发生关系密切

2 麦门冬汤的组成及作用机理探讨

2.1 麦门冬汤的组成

2.2 麦门冬汤现代药理研究

2.3 麦门冬汤对实验性肺纤维化模型具有较好的防治作用

3 本实验的结果讨论

3.1 博来霉素溶液可以诱导 BALB/C 小鼠 SSc 模型

3.2 麦门冬汤可以治疗 SSc

3.3 本实验结果表明麦门冬汤可以调节 SSc 模型小鼠的免疫力

结论

致谢

参考文献

附录

附录 2：文献综述

附录 3：在校期间论文论著及科研情况