复发转移乳腺癌中ERK、JNK/MAPK通路的激活或抑制及FAK、Ezrin、Paxillin、Integrinβ3、TrkC的表达与ERK/MAPK通路关系的研究

摘要

目的：丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)包括ERK、JNK等，它是细胞内重要的信号传导通路，在细胞的恶性转化和肿瘤的发生发展中起重要作用。FAK、Ezrin、Paxillin、Integrinβ3、TrkC可能与此信号传导通路有关。本研究检测ERK、JNK、FAK、Ezrin、Paxillin、Integrinβ3、TrkC在复发转移与未复发转移乳腺癌中的表达情况，探讨在复发转移乳腺癌中ERK、JNK/MAPK通路的激活情况，及FAK、Ezrin、Paxillin、Integrinβ3、TrkC的表达与ERK/MAPK通路的关系。 方法：收集1994-2006年广西医科大学第一附属医院外科及广西中医学院第一附属医院外科住院的女性乳腺癌患者共100例，收集临床资料，通过电话或通信随访，获得复发及生存情况。100例病人分成两个组：实验组为乳腺癌根治术后半年以上出现复发转移者共46例，标本取自1994-2006年在该两所医院手术并有完整的临床资料的患者，对照组为手术时间相近、发病年龄相近的乳腺癌根治术后未发生复发转移者共54例。石蜡封存组织块切片，应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术，检测ERK、JNK、FAK、Integrinβ3、Paxillin、Ezrin、TrkC、ER、PR、CerbB-2在实验组、对照组的表达情况，并对实验组、对照组的临床病理因素进行研究。 结果：①ERK在实验组(复发转移组)与对照组(无复发转移组)中的阳性表达率分别为63.04％、38.89％，ERK在实验组中的表达较对照组显著增高(P<0.05)；JNK在实验组与对照组中的阳性表达率分别为60.87％，75.93％(p>0.05)，JNK在对照组中表达较与实验组高，但差异无显著性(P>0.05)。②FAK在实验组与对照组中的阳性表达率分别为73.91％、42.59％，FAK在实验组中的表达较对照组显著增高(p<0.01)；Ezrin在实验组与对照组中的阳性表达率分别为78.26％、51.85％，Ezrin在实验组中的表达较对照组显著增高(p<0.01)。③Paxillin在实验组与对照组中的阳性表达率分别为50.00％，40.74％，(p>0.05)，Paxillin在实验组的表达较对照组增高，但差异无显著性(P>0.05)。④Integrinβ3在实验组与对照组中的阳性表达率分别为58.70％、33.33％，Integrinβ3在实验组中的表达较对照组显著增高(p<0.05)；TrkC在实验组与对照组中的阳性表达率分别为50.00％、24.07％，TrkC在实验组中的表达较对照组显著增高(p<0.01)。⑤FAK、ERK、Ezrin的表达呈现彼此正相关的关系(P均<0.05)。⑥Integrinβ3的表达与Ezrin相关(P<0.01)，但与ERK不相关(P>0.05)。⑦TrkC与ERK、Ezrin、FAK、Integrinβ3表达均无相关性(P>0.05)。⑧对临床病理因素包括发病年龄、肿瘤大小、腋淋巴结转移状态、pTNM分期进行寿命表法及单因素Kaplan-Meier法分析，结果显示：发病年龄、肿瘤大小、腋淋巴结转移状态、pTNM分期均与乳腺癌根治手术后复发转移率有关。⑨对十个实验指标包括ERK、JNK、FAK、Ezrin、Integrinβ3、TrkC、Paxillin、ER、PR、CerbB-2进行寿命表法及单因素Kaplan-Meier法分析，结果显示：ERK、FAK、Ezrin、Integrinβ3、TrkC、ER六个实验指标均与乳腺癌根治手术后复发转移率有关。⑩将单因素分析中与乳腺癌根治手术后复发转移有关的临床病理因素及实验指标包括发病年龄、肿瘤大小、腋淋巴结转移状态、pTNM分期、ERK、FAK、Ezrin、Integrinβ3、TrkC、ER共十个因素放入多因素COX模型中进行分析，结果显示：在α=0.05水平上，经逐步后退法筛选，逐步剔除pTNM分期、TrkC、肿瘤大小、腋淋巴结转移状态、发病年龄、Integrinβ3后，显示ER、FAK、ERK、Ezrin与乳腺癌根治手术后复发转移有关(P均<0.01)。其中ER的B(相关系数)为-1.287，OR(比值比)为0.276；ERK、Ezrin、FAK的B依次为1.908、1.611、1.529，OR依次为6.742、5.007、4.611。 结论：⑴实验组中，ERK通路明显激活，JNK通路可能受抑制。ERK通路的激活、JNK.通路受抑制在乳腺癌根治术后复发转移的发生中扮演了重要角色。⑵实验组中FAK、Ezrin、Integrinβ3、TrkC表达增高，受到激活，促进乳腺癌根治手术后复发转移。⑶实验组中Paxillin可能被激活，促进乳腺癌根治手术后复发转移。⑷实验组中ER表达降低，在乳腺癌根治手术后复发转移过程中受到抑制或拮抗。⑸FAK、Ezrin协同作用或与ERK结合成复合物，激活ERK/MAPK通路，促进乳腺癌根治手术后复发转移。⑹Integrinβ3与Ezrin有协同作用，促进乳腺癌根治手术后复发转移，但Integrinβ3的作用不是通过ERK/APK通路的激活实现的。⑺TrkC的表达促进乳腺癌根治手术后复发转移，TrkC的作用与ERK/MAPK通路的激活无关，可能与乳腺癌细胞的自分泌有关。⑻临床病理因素中，腋淋巴结转移、肿瘤大小>5 cm、发病年龄<40岁、临床分期Ⅲ期是乳腺癌根治手术后复发转移的危险因素。⑼实验指标中，FAK、ERK、Ezrin、Integrinβ3、TrkC是乳腺癌根治手术后复发转移的危险因素，ER是乳腺癌根治手术后复发转移的保护因素。⑽所有因素(包括临床病理因素和实验指标)中，FAK、ERK、Ezrin是乳腺癌根治手术后复发转移的独立危险因素，ER是乳腺癌根治手术后复发转移的独立保护因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

前言

实验材料与方法

1.研究对象来源及分组

2.标本处理：蜡块连续切片，切片厚4um，60～80℃下烤片2小时

3.主要试剂和仪器设备

3.1主要试剂

3.2设备

4.免疫组化法及核酸原位杂交法实验步骤

4.1免疫组化法进行ER、PR、CerbB-2、Paxillin、Ezrin、ERK、JNK、TrkC、FAK水平检测(Super Picture　TM polymer免疫组化两步法)

4.2核酸原位杂交法进行Integrin β 3mRNA检测

4.3对照设置

5.结果判断及半定量分析

6.统计学处理

实验结果

1.免疫组织化学法(Super Picture　TM polymer免疫组化两步法)检测 RK、JNK、FAK、Ezrin、Paxillin、TrkC、ER、PR、Cerbβ-2表达情况，并经显微镜照相系统拍摄典型阳性镜下所见

2.核酸原位杂交法检测Integrinβ3表达情况，并经显微镜照相系统拍摄典型阳性镜下所见

3.各实验指标的表达与乳腺癌根治手术后复发转移的关系

4.各实验指标的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.1 ERK的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.2 JNK的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.3 FAK的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.4 Ezrin的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.5 Paxillin的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.6 Integrin β3的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.7TrkC的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.8 ER的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.9 PR的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

4.10 CerbB-2的表达与乳腺癌临床病理因素的关系

5.各指标的相关性（采用spearman等级相关分析）

6.乳腺癌的各临床病理因素及实验指标的单因素分析及多因素COX模型分析

6.1寿命表法分析患者各因素的累积复发转移率及单因素Kaplan-Meier法分析复发转移的影响因素

6.2多因素的COX模型分析结果

讨论

1.复发转移乳腺癌中FAK、Ezrin、Paxillin、Integrin β 3、TrkC的表达与ERK、JNK/MAPK通路激活或抑制关系的研究

1.1复发转移乳腺癌中ERK和JNK信号通路的表达

1.2复发转移乳腺癌中FAK、Ezrin、Paxillin、Integrin β3、TrkC的表达与ERK通路关系的研究

2.乳腺癌根治切除手术后复发转移的危险因素分析

2.1与乳腺癌根治切除手术后复发转移相关的临床病理因素

2.2与乳腺癌根治切除手术后复发转移相关的实验指标

参考文献

全文总结

附图

文献综述一：MAPK信号传导通路与乳腺癌的关系

1.ERK与乳腺癌的关系

2.JNK通路与乳腺癌的关系

3.p38通路与乳腺癌的关系

4.ERK5通路与乳腺癌的关系

参考文献

文献综述二：早期乳腺癌复发、转移的肿瘤标志物

1.早期乳腺癌的定义及特点

2.肿瘤标志物的定义、特点及分类

3.早期乳腺癌的有价值肿瘤标志物

参考文献

致谢

博士研究生阶段发表的文章