Ras-Rho信号传导通路与PPARs在调节血管内皮细胞缝隙连接蛋白43中的作用研究

摘要

目的：探讨Ras信号传导通路抑制剂（farnesylthiosalicylic acid，FTS）与PPARγ激动剂rosiglitazone和拮抗剂GW9662在调节血管内皮细胞缝隙连接蛋白43(connexin43，Cx43)表达的机制及其可能的关系。
　　方法：通过培养人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)，用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测不同浓度梯度，即0.1、1、10、25、50ug/mL脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)培养6、12、24小时诱导内皮细胞抑制情况，经过分析抑制率及统计学意义，从而选择最适LPS作用时间(24h)及浓度(10ug/mL)与Ras抑制剂FTS、PPARγ激动剂(rosiglitazone，RSG)及PPARγ拮抗剂(GW9662)共同作用。以10ug/mLLPS与Ras抑制剂（10μM）、PPARγ激动剂（10μM）及PPARγ拮抗剂（5μM）共同作用24h后，用蛋白印迹(Western Blotting)法检测各药物分组干预后CX43总蛋白的表达量。
　　结果：不同浓度梯度LPS诱导的细胞抑制情况明显，且呈浓度依赖型及时间依赖型，即随着时间的推移及浓度增大而细胞活力下降，LPS促使细胞死亡数增加，与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。WB蛋白定量分析后发现LPS诱导组的CX43总蛋白表达水平下调，与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。LPS和FTS共培养组与LPS诱导组相比，细胞抑制率下降，CX43总蛋白表达水平上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。LPS和RSG共培养组与LPS诱导组相比，细胞抑制率下降，CX43总蛋白表达水平上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。LPS和GW9662共培养组与LPS诱导组相比，细胞抑制率下降，CX43总蛋白表达水平上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。LPS、FTS和RSG共培养组与FTS和LPS共培养组相比，Cx43总蛋白表达无差异(P＞0.05)。LPS、FTS和GW9662共培养组与FTS和LPS共培养组相比，Cx43总蛋白表达水平下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论：FTS通过阻断Ras信号通路可以增加CX43总蛋白表达，PPAR激动剂可协同调节，Ras抑制剂对LPS诱导的Cx43总蛋白表达的抑制作用可被PPAR拮抗剂消除，Ras-Rho信号传导通路对Cx43总蛋白的表达作用可能由PPARs介导。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

2．实验方法

结果

1．人心脏微血管内皮细胞培养的结果

2．MTT法检测药物干预后细胞活力的结果

3．Western Blotting法检测Cx43总蛋白的表达量

讨论

结论

参考文献

中英文缩写对照表

综述

参考文献

致谢

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