清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染BALB/c小鼠模型IL-17、JAK-STAT信号通路的影响

摘要

目的：通过建立免疫低下肺部感染BALB/c小鼠模型，探讨清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染小鼠血清中细胞因子IL-17表达及肺组织JAK2-STAT3信号转导通路活化的影响，阐述清肺培元颗粒治疗免疫低下肺部感染的部分作用机制，为清肺培元颗粒的临床应用以及今后的进一步研究提供实验依据。
　　方法：（1）造模及给药：将60只清洁级健康雌性BALB/c小鼠适应性喂养3天后，随机抽取12只做为正常组，其余小鼠腹腔注射FLV病毒，21天后鼻腔滴注肺炎链球菌，建立免疫低下肺部感染小鼠模型。造模成功后，将造模小鼠按随机数字表法分为4组：免疫低下肺部感染模型组（模型组）、齐多夫定组、唐草片组、清肺培元组。各用药组小鼠每天灌胃相应的药物，正常组、模型组灌胃同体积生理盐水，连续灌胃14天。（2）指标测定：实验中观察记录小鼠的一般状况，末次给药后6小时，采血分离血清，解剖取肺脏组织，-80℃保存。酶联免疫吸附法测定各组小鼠血清中IL-17含量变化；Western Blot技术检测各组小鼠肺组织中JAK2、p-STAT3蛋白表达；Real time PCR技术检测各组小鼠肺组织中JAK2、STAT3 mRNA表达。（3）统计分析：对IL-17、JAK2、p-STAT3蛋白表达检测结果采用SPSS17.0软件进行分析，P＜0.05为差异有统计学意义；JAK2、STAT3 mRNA表达结果采用2-ΔΔCt法比较组间差异，2-ΔΔCt＞2或2-ΔΔCt＜0.5为差异有意义。
　　结果：（1）小鼠一般情况变化：免疫低下肺部感染BALB/c小鼠模型构建成功，清肺培元颗粒、齐多夫定、唐草片对模型小鼠一般状况均有改善作用，小鼠体重增加，呼吸困难等症状的严重程度减轻，尤以清肺培元组最为明显，具体表现为咳嗽、喘息潜伏期延长，腹肌抽搐不明显，状态较活跃，皮毛色泽较好。齐多夫定组、唐草片组对小鼠改善情况次之。（2）各组小鼠血清中IL-17水平变化：模型组小鼠血清中IL-17表达水平较正常组升高（P＜0.05）；清肺培元组IL-17表达量低于模型组（P＜0.05），齐多夫定组、唐草片组IL-17表达水平与模型组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）各组小鼠肺组织JAK2蛋白表达水平变化：模型组小鼠肺组织JAK2蛋白表达高于正常组（P＜0.05）；与模型组对比，各用药组JAK2蛋白表达均降低（P＜0.05）；各用药组之间对比，清肺培元组JAK2蛋白表达水平低于齐多夫定组、唐草片组（P＜0.05），而齐多夫定组与唐草片组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）各组小鼠肺组织JAK2 mRNA表达水平变化：模型组小鼠肺组织JAK2 mRNA表达高于正常组（2-ΔΔCt＞2）；各用药组JAK2 mRNA表达较模型组均降低（2-ΔΔCt＜0.5）；清肺培元组与齐多夫定组对比，JAK2 mRNA表达水平降低，差异有意义（2-ΔΔCt＜0.5），清肺培元组与唐草片组对比，JAK2 mRNA相对表达量差异无意义（0.5＜2-ΔΔCt＜2）。（5）小鼠肺组织p-STAT3蛋白表达水平变化：模型组小鼠肺组织p-STAT3蛋白表达高于正常组（P＜0.05）；与模型组对比，清肺培元组、唐草片组p-STAT3蛋白表达降低（P＜0.05），齐多夫定组p-STAT3蛋白表达升高（P＜0.05）；用药组之间对比，清肺培元组p-STAT3蛋白表达低于唐草片组、齐多夫定组，差异有统计学意义（P＜0.05）。（6）小鼠肺组织STAT3mRNA表达水平变化：模型组小鼠肺组织STAT3 mRNA表达高于正常组（2-ΔΔCt＞2）；清肺培元组、齐多夫定组STAT3 mRNA表达水平较模型组均降低（2-ΔΔCt＜0.5），唐草片组与模型组比较STAT3 mRNA表达差异无意义（0.5＜2-ΔΔCt＜2）；清肺培元组STAT3 mRNA表达低于唐草片组（2-ΔΔCt＜0.5），清肺培元组与齐多夫定组对比STAT3 mRNA表达差异无意义（0.5＜2-ΔΔCt＜2）。
　　结论：（1）清肺培元颗粒可以改善免疫低下肺部感染模型小鼠的一般情况，从小鼠行为活动指征方面验证了清肺培元颗粒的有效性。（2）IL-17表达的升高及JAK2-STAT3信号转导通路的活化与免疫低下肺部感染的发生机制密切相关。（3）清肺培元颗粒可以有效抑制小鼠血清中细胞因子IL-17的表达，提示清肺培元颗粒的临床抗炎作用机制与抑制 IL-17表达有关。（4）清肺培元颗粒能够抑制JAK2-STAT3信号转导通路的活化，降低JAK2蛋白转录表达，阻断JAK2蛋白及STAT3蛋白的激活，抑制p-STAT3蛋白的产生，提示清肺培元颗粒提高免疫力抗炎抗感染的部分作用机制与抑制JAK2-STAT3信号通路活化相关。（5）清肺培元颗粒可能通过抑制JAK2-STAT3信号通路活化从而调控IL-17的表达，控制炎症反应，改善免疫低下肺部感染症状。

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缩略词表

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 取材及检测方法

4 统计学处理

结果

1 各组小鼠一般情况变化

2 清肺培元颗粒对模型小鼠血清细胞因子IL-17表达水平的影响

3 清肺培元颗粒对小鼠肺组织JAK2蛋白表达的影响

4 清肺培元颗粒对小鼠肺组织JAK2 mRNA表达的影响

5 清肺培元颗粒对小鼠肺组织p-STAT3蛋白表达的影响

6 清肺培元颗粒对小鼠肺组织STAT3 mRNA表达的影响

讨论

1 免疫低下肺部感染的研究现状

2 JAK-STAT信号转导通路在机体免疫功能及炎症进程中的作用

3 白介素17的信号传导及功能研究

4 清肺培元颗粒组方用药特点

5 清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染BALB/c小鼠实验结果分析

6 存在的问题及展望

结论

致谢

参考文献

附录

附录1 文献综述

附录2 在校期间论文论著和科研情况