AT1受体调控链脲佐菌素致胰岛β细胞凋亡及在厄贝沙坦保护机制中的作用研究

摘要

目的:以建立胰岛素瘤NIT-1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因沉默模型为基础，研究AT1受体调控链脲佐菌素(STZ)诱导的胰岛β细胞凋亡的变化效应，并以此角度探讨厄贝沙坦拮抗STZ诱导胰岛β细胞凋亡的保护机制。
　　方法:(1) AT1R基因沉默细胞模型:采用siRNA干扰技术沉默AT1R:针对小鼠AT1R，设计并合成3对siRNA干扰序列，以脂质体为载体转染至NIT-1细胞。用不同浓度的标记荧光分子的siRNA序列转染细胞，荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率;Ral-time PCR检测AT1R mRNA表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果。(2)实验分组:①空白组，②STZ组，③厄贝沙坦+STZ组，④si-AT1R组，⑤si-AT1R+ STZ组，⑥si-AT1R+厄贝沙坦+STZ组，以5mM STZ干预30min特异性损伤NIT-1细胞诱导细胞凋亡;厄贝沙坦干预时先用0.01mM厄贝沙坦孵育细胞2h，再用5 mM STZ诱导细胞凋亡，然后换含0.01 mM厄贝沙坦的完全培养基继续培养24h。实验重复3-6次。(3)检测指标:①细胞凋亡观察:采用Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况，②细胞凋亡率检测:AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测，③Caspase-3、NADPH表达:Real-time PCR检测各实验组细胞的Caspase-3、NADPH mRNA表达量。
　　结果:(1)40nM siRNA转染的荧光强度最强，转染后AT1R mRNA表达量明显减少，干扰序列si-AT1R-2转染24h的沉默效果最佳(92.20％)。(2)①细胞凋亡率:与空白组比较，STZ组凋亡明显升高（P＜0.05）;与STZ组相比，厄贝沙坦+STZ组凋亡明显降低(P＜0.05);与空白组比较，si-AT1R组凋亡无明显变化，差异无统计学意义(P＞0.05);与STZ组相比，si-AT1R-2+STZ组凋亡减少，差异有统计学意义(P＜0.05);与si-AT1R-2组相比，si-AT1R-2+STZ组凋亡升高(P＜0.05);与si-AT1R-2+STZ组相比，si-AT1R-2+厄贝沙坦+STZ组凋亡减少(P＜0.05);沉默AT1R后，厄贝沙坦减少细胞凋亡率的幅度降低了，即其抗凋亡的能力下降了，差异有统计学意义(P＜0.05)。②Caspase-3、NADPH mRNA表达量:与空白组比较，STZ组两指标均明显升高(P＜0.05);与STZ组相比，厄贝沙坦+STZ组两指标均明显降低(P＜0.05);与空白组比较，si-AT1R组两指标无明显变化，差异无统计学意义(P＞0.05);与STZ组相比，si-AT1R-2+STZ组Caspase-3 mRNA表达量有减少趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)，NADPH mRNA表达量无明显变化;与si-AT1R-2组相比，si-AT1R-2+STZ组两指标均升高(P＜0.05);与si-AT1R-2+STZ组相比，si-AT1R-2+厄贝沙坦+STZ组两指标均减少(P＜0.05):沉默AT1R后，Caspase-3、NADPHmRNA表达量减低的幅度均有下降的趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:①本研究建立稳定的胰岛β细胞AT1受体基因沉默NIT-1细胞模型;②STZ可通过AT1受体水平增高诱导胰岛β细胞凋亡，厄贝沙坦可能通过类似于AT1受体反向激活的机制抑制其凋亡，但可能与NADPH、Caspase-3调控关系不大。此外，厄贝沙坦可能还存在其它拮抗胰岛β细胞凋亡的通路。

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摘要

前言

第一部分 siRNA干扰沉默胰岛β细胞AT1受体

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

第二部分 AT1受体调控链脲佐菌素致胰岛β细胞凋亡及在厄贝沙坦保护机制中的作用研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

参考文献

综述 AT1受体在ARB类药物脏器保护机制中的角色扮演

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