PARP-1对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响

摘要

目的：检测不同乳腺细胞株PARP-1基因的表达，筛选优势表达细胞株;利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调人乳腺癌细胞系MDA-MB-231PARP-1基因的表达，并构建PARP-1基因稳定干扰的乳腺癌MDA-MB-231细胞株，为后续研究PARP-1对乳腺癌细胞生物学行为的影响奠定实验基础。
　　方法：1、采用实时荧光定量PCR检测不同乳腺细胞株PARP-1基因的表达，筛选出优势表达细胞株;2、根据Genbank提供的PARP-1基因的cDNA序列，设计并合成针对PARP-1基因的siRNA，包装成慢病毒并测定滴度;3、利用慢病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞株，获得PARP-1基因干扰稳定细胞株;4、应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞PARP-1基因的表达情况;5、利用蛋白质免疫印迹法检测各组细胞PARP-1基因及蛋白的表达情况。
　　结果：1、MCF10a、MCF7、MDA-MB-231细胞株PARP-1基因的表达量分别是1.007±0.143、2.310±0.411、7.894±1.639，MDA-MB-231细胞的PARP-1mRNA量明显高于另外两组(P=0.000);2、经测序鉴定，成功合成了针对PARP-1的siRNA，成功获得了shRNA慢病毒，病毒滴度为3×108TU/ml;3、慢病毒成功感染了MDA-MB-231细胞株，在荧光显微镜下可观察其转染效率达90％以上;4、实时荧光定量PCR实验结果显示空白对照组PARP-1mRNA的相对表达量与阴性对照组PARP-1的相对表达量无明显差异(1.001±0.056vs1.022±0.021，P=0.889)，PARP-1组PARP-1mRNA的相对表达量显著低于空白对照组和阴性对照组PARP-1mRNA的相对表达量（1.001±0.056vs0.1656±0.041，P=0.000;1.022±0.021vs0.1656±0.041，P=0.000）;5、蛋白质免疫印迹实验结果显示空白对照组、阴性对照组、PARP-1组PARP-1蛋白的相对表达量分别为0.9629±0.0056、0.9425±0.008、0.5733±0.0106，与空白对照组和阴性对照组相比，PARP-1组PARP-1蛋白的表达显著降低（P＜0.05）。
　　结论：本部分筛选出PARP-1优势表达乳腺癌细胞株MDA-MB-231，成功构建了针对PARP-1的shRNA慢病毒，并建立了PARP-1基因稳定干扰的MDA-MB-231细胞株。

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中英文缩略词简表

摘要

前言

第一部分 慢病毒介导的PARP-1基因稳定干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞株的构建

1 材料和试剂

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二部分 干扰PARP-1基因对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响

1 材料与试剂

2 实验方法

3 结果

4 讨论

参考文献

综述

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文