Rap1GAP基因对宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移、侵袭能力的影响

摘要

目的：探讨抑癌基因Rapl GAP对宫颈癌．HeLa细胞增殖、转移、侵袭能力的影响及其分子生物学机制。宫颈癌(Carcinoma of Cervix)是全球妇女中发病率仅次于乳腺癌而占第2位的恶性肿瘤，近年其发病率上升、发病年龄年轻化、加之人口的老龄化，使得宫颈癌的患病人数较以往有了明显增多。抑制宫颈癌恶性增殖、侵袭转移对于宫颈癌患者的治疗、预后及提高生存率具有重要意义。目前认为，肿瘤的发生是由调节细胞增殖、凋亡、基因稳定性、血管生成、浸润或转移的基因异常所启动，在肿瘤细胞多因素、多阶段的转移过程中，抑癌基因能够充分发挥抑制作用。RaplGAP(Rapl GTPase-activating protein 1)是Rap1特异的GTP酶活化蛋白，催化Rap1从有活性的GTP结合形式转变成无活性的GDP形式，而Rap1是一种小分子G蛋白，参与细胞的多种功能，调节细胞的增殖、分化及整合蛋白介导的细胞基质粘附和钙粘蛋白介导的细胞间的粘附。Rap1活性的失调与恶性肿瘤的发生发展有关，因此作为调控Rap1活性的Rap1GAP与肿瘤的发生发展也会有密切关系。 Rap1功能的发挥具有细胞特异性，如在Swiss3T3细胞中，Rap1能够促进DNA合成，加速增殖，而在Ras转染的NIH3T3细胞及星形角质细胞中，抑制增殖。因此，Rap1GAP的作用也可能具有细胞特异性。本文选取宫颈癌HeLa细胞系，探讨Rap1GAP基因对HeLa细胞增殖、转移、侵袭能力的影响，并初步研究Rap1 GAP抑制肿瘤转移的作用机制。 方法：选用HeLa细胞系(人宫颈癌细胞系)、HeLa-pEGFP(稳定表达空质粒的人宫颈癌细胞株)和Hel-a-Rapl GAP细胞(稳定表达Rapl GAP基因的人宫颈癌细胞株)进行体外培养；MTT法检测Rapl GAP基因对HeLa细胞增殖的影响；细胞一基质粘附实验、细胞划痕实验、体外细胞迁移实验、侵袭实验研究Rap1GAP基因对HeLa细胞粘附、迁移、侵袭能力的影响；明胶酶谱技术检测细胞内MMP蛋白表达水平。 结果：1.HeLa-Rap1GAP细胞组与对照组(未转染组和转染空质粒组)细胞相比较，生长速度明显减慢(p<0.05)；2.HeLa-Rap1GAP细胞组、HeLa-pEGFP细胞组和HeLa细胞组与FN粘附率分别为74.3±5.2﹪、90.8±12.6﹪和92.5±14.1﹪，HeLa-Rap1GAP细胞组与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05)，HeLa-pEGFP细胞组与HeLa细胞组无差异(P>0.05)；3.三组细胞迁移距离分别为14.6±2.219、27.4±6.378、28.7±5.529μm，HeLa-Rap1GAP细胞组与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05)，HeLa-pEGFP细胞组与HeLa细胞组无差异(P>0.05)：4.三组细胞迁移实验穿膜细胞数分别为136.20±9.230、216.2±12.872、220.8±27.013个，HeLa-Rap1GAP细胞组与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05)，HeLa-pEGFP细胞组与HeLa细胞组无差异(P>0.05)；5.三组细胞侵袭实验穿膜细胞数分别为121.4±8.735、213.0±31.847、216.2±6.458个，HeLa-Rap1GAP细胞组与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05)，HeLa-pEGFP细胞组与HeLa细胞组无差异(P>0.05)：6.HeLa-RaplGAP组细胞内MMP-2、MMP-9表达均明显降低。 结论：1.Rap1GAP基因抑制宫颈癌HeLa细胞增殖。2.Rap1GAP基因在体外具有抑制宫颈癌HeLa细胞迁移的作用。3.Rap1GAP基因在体外具有抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的作用。4.Rap1GAP基因抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的可能机制是降低基质金属蛋白酶的表达。

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综述整合蛋白激活FAK信号转导通路与肿瘤相关性研究

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