慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制

摘要

目的:研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌He La细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及其机制。方法:构建4种靶向TPX2基因的慢病毒表达载体(LV-TPX2-sh RNA-1/2/3/4),同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌He La细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 m RNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-sh RNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达。结果:与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制He La细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-sh RNA-1最为明显(P<0.01),故选择LV-TPX2-sh RNA-1进行后续实验。与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低He La细胞增殖及迁移能力(P<0.05),使G2及S期细胞比例明显增加(P<0.05),且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平(P均<0.05)。结论:沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、AuroraA蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关。