嗜热蛋白酶生产菌Bacillus sp.DPE的筛选、产酶条件及其酶学性质研究

摘要

该研究从温泉水中筛选到一株产嗜热蛋白酶的芽孢杆菌（Bacillus sp.DPE<,7>）.该菌最适生长培养基为：葡萄糖10g,蛋白胨2g,酵母浸出粉2g,NaCl3g,水1000ml,pH8.0;最适生长温度为65℃;最适生长转速为150rpm.结果表明,由Bacillus sp.DPE<,7>产生的蛋白酶是一个稳定性相对较好、最适作用pH谱相对较宽（6.0-10.0）的嗜热（最适作用温度为85℃）蛋白酶类.该菌是一株具有进一步遗传改造利用价值的产嗜热蛋白酶的菌株.

目录

第一章前言

一、蛋白酶概况

二、嗜热蛋白酶及其来源

三、嗜热蛋白酶的特点

四、嗜热蛋白酶的稳定机制

五、嗜热蛋白酶的基因及其克隆策略

六、嗜热蛋白酶的生产

七、嗜热蛋白酶的提取和纯化

八、嗜热蛋白酶的应用

九、嗜热蛋白酶研究中存在的问题和国内研究现状

十、本研究的目的和内容

第二章材料与方法

1.材料

1.1样品

1.2菌株与质粒

1.3培养基

1.4常用溶液、缓冲液

1.5主要仪器设备

2.方法

2.1样品采集

2.2样品处理

2.3菌株筛选

2.4菌株保存

2.5菌株的鉴定

2.6菌株生长特性的测定

2.7产酶条件的研究

2.8酶在细胞内外的分布

2.9粗酶制取

2.10 DNA提取

2.11 DNA溶液中蛋白质及RNA的去除

2.12琼脂糖凝胶电泳

2.13电洗脱法回收DNA片段

2.14 DNA连接

2.15 DNA限制性内切酶酶切

2.16感受态细胞的制备

2.17质粒DNA的转化

第三章结果

3.1产嗜热蛋白酶的菌株

3.2 DPE7——一株芽孢杆菌(Bacillus sp)

3.3 Bacillus sp.DPE7的生长条件

3.3.1菌株生长的最适碳源

3.3.2菌株生长的最适氮源

3.3.3菌株生长的最适碳氮比

3.3.4菌株生长的最适NaCl浓度

3.3.5菌株生长的最适温度

3.3.6菌株生长的最适pH值

3.3.7菌株生长的最适培养转速

3.4 Bacillus sp.DPE7的产酶条件

3.4.1碳源与酶活

3.4.2葡萄糖浓度与酶活

3.4.3氮源与酶活

3.4.4碳氮比与酶活

3.4.5 Mn2+与酶活

3.4.6 Ca2+与酶活

3.4.7吐温与酶活

3.4.8初始pH与酶活

3.4.9转速与酶活

3.4.10菌体生长与酶活

3.4.11初始菌液接种量与酶活

3.5酶在细胞内外的分布

3.6酶的性质

3.6.1粗蛋白酶作用的最适pH值

3.6.2粗蛋白酶作用的最适温度

3.6.3粗蛋白酶的pH稳定性

3.6.4粗蛋白酶酶的热稳定性

3.6.5 Ca2+与粗蛋白酶的热稳定性

3.6.6有机溶剂与粗蛋白酶的热稳定性

3.6.7抑制剂与粗蛋白酶酶活

3.6.8蛋白质变性剂与粗蛋白酶酶活

第四章总结

第五章研究中存在的问题与下一步的研究设想

参考文献

致谢