猪大肠杆菌病原性腹泻IgY抗体口服微胶囊的制备及其缓释效果评价

摘要

肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli:ETEC)感染引起仔猪腹泻肠道传染病。此病不仅严重影响仔猪的生长发育、而且导致高死亡率。由ETEC引起仔猪腹泻发病率约占引起仔猪腹泻病原的40％，其爆发严重危害养猪业的发展。本研究初步开发一种产毒素大肠大肠杆菌的IgY壳聚糖．海藻酸钠微胶囊，通过口服，被肠道吸收后，发挥被动免疫作用，对该病进行预防及治疗。 1、将产肠毒素埃希氏大肠杆菌(ETEC)K88，K99，987P标准菌株混合，分别与油乳剂、蜂胶、氢氧化铝胶三种免疫佐剂混合，用该三种佐剂对随机分组的健康产蛋鸡进行首免、二免、三免间隔分别为14天(d)及31天(d)免疫，摸索卵黄抗体的消长规律。经过比较发现，以油乳剂作为免疫佐剂，对产蛋鸡进行首免、二免、三免问隔30d的免疫方案，能产生较高效价的IgY抗体，且维持时间较长。收集此lgY抗体，进行去脂纯化。选用水稀释法、氯仿抽提法，正辛酸-硫酸铵共沉淀法三种方法进行纯化效果的比较。以IgY纯化的效果、纯化后的活性、回收率、含量作为指标，发现以水稀释法进行去脂，硫酸铵除杂蛋白效果最为理想，价格低廉，适宜大规模生产。 2、猪源大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠(ACS)微胶囊制备条件的探讨，主要分为两部分：第一部分筛选成囊性好且膜强度适中，适合进行胃肠控释的壳聚糖-海藻酸钠的空白微胶囊最佳成囊条件，经单因素试验对主要影响成囊条件的两个因素：海藻酸钠及氯化钙的浓度进行筛选。并以影响微胶囊膜强度的因素为条件，以微胶囊经人工胃液(3h)-人工肠液(7h)膨胀系数为研究对象，进行正交实验L9(43)，初步确定成囊效果，缓释性最好的制备条件为：0.2-0.4％混合分子量的壳聚糖溶液中加入氯化钙(CaCl2)，使CaCl2的浓度为1-2％，并调节pH到4-6，1-3％海藻酸钠，反应时间15min，37℃晾干3h。第二部分，把IgY按上述条件进行包囊，研究该微胶囊对IgY的最大包封浓度，经测定IgY在壳聚糖-海藻酸钠微胶囊中的最高包封浓度为75％。 3、肠毒素大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊经体外释放试验证实：IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊，能在人工胃液(SGF)中(3h)对IgY起到良好的保护作用，在人工肠液(SIF)6h以内IgY的释放率可高达90％以上。结果说明IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊能在胃肠环境中起良好的控释作用。对IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊进行保存实验，发现在12个月的保存时间内能稳定地保存芯材的活性及蛋白含量。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：论文常用缩写词

声明

第一章文献综述

第二部分微胶囊的研究进展

第三部分本课题研究目的和意义

第二章猪源大肠杆菌IgY的获得、纯化与稳定性检测

实验一猪源大肠杆菌IgY的获得

1材料方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验二IgY卵黄抗体的提取与初步纯化

1材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验三IgY稳定性评价

1材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

第三章口服肠溶型IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步开发

实验一口服肠溶型壳聚糖-海藻酸钠空白微胶囊的制备条件研究

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验二IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步开发

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

第四章IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步评价

实验一IgYACS微胶囊在人工胃液、人工肠液中的控释性能

1.材料与方法

2.结果

3.讨论与分析

4.小结

实验二IgY ACS微胶囊常温保存试验

1.材料及方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

结论

参考文献

致谢

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