抗仔猪病毒性腹泻IgY微胶囊的制备及效果评价

摘要

仔猪腹泻是目前严重危害我国养猪业发展的主要疾病，引起仔猪腹泻的病毒源主要是猪传染性胃肠炎病毒(Poorcine transmissibLe gastroenteritis，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Poricine epidemic diarrhoea，PEDV)和轮状病毒(Rotavirus，RV)。通过本实验制备抗仔猪病毒性腹泻的高免全蛋粉和明胶．海藻酸-IgY微胶囊发挥被动免疫作用，对该病进行预防及治疗。
　　 1、采用猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒油乳苗（以下简称‘三联苗’）与不同的佐剂混合免疫鸡群的方法。间接ELISA检测结果：佐剂中添加胸腺肽免疫组免疫效果明显优于仅用油佐剂免疫组，其产生的IgY效价高且持续时间长。先用弱毒苗做基础免疫，再用油佐剂苗加强免疫效果明显优于仅用油佐剂苗免疫组。因此，以弱毒苗进行基础免疫，再用胸腺肽油佐剂苗进行加强免疫是制备IgY的最佳方法。
　　 2、利用喷雾干燥技术制备微胶囊及高免全蛋粉，通过对喷雾干燥工艺条件的优化，获得制备微胶囊最佳工艺为：进风温度170℃、进料速度10 mL/min、干燥速度lOs、出口温度70℃；制备高免全蛋粉最佳工艺为：进风温度180℃、进料速度10mL/min、干燥速度5s、出口温度70℃，在上述条件下制备微胶囊及高免全蛋粉，性状最好且IgY活性保持较高水平。
　　 为保护IgY口服时不受酸、碱及胃蛋白酶的破坏，本试验选用天然材料明胶和海藻酸钠作为壁材，按上述筛选喷雾干燥的最佳工艺，研究制各明胶．海藻酸钠-IgY微胶囊的成囊条件。经筛选优化确定微胶囊成囊的最佳条件为：明胶浓度4％，海藻酸钠0.75％，Tween-801％，成囊溶液pH值4.0。以此条件制备微胶囊的包封率为75％，IgY活性保持在80％以上。通过人工胃肠液的体外释放试验表明，微胶囊在人工胃液2h的释放率不超过10％，人工肠液4h的释放率达到超过80％。采用间接ELISA方法和SDS-PAGE电泳对微胶囊中IgY结构和活性进行检测，结果显示，微胶囊通过人工胃液再进入肠液时，释放出的IgY结构不受影响，仍保持完整性且活性保持在80％以上，达到了缓释、控释的目的，保护了IgY经过胃时不受酸、碱及胃蛋白酶的破坏降解，保持较高的生物学活性定点到小肠释放。对微胶囊进行保存期试验，结果发现在12个月内能稳定地保存芯材IgY的活性及蛋白质含量。
　　 3、动物试验结果显示：在早期断奶仔猪的饲料中添加0.5％的高免全蛋粉可以有效降低仔猪腹泻率、减小腹泻频率。提高日增重和料肉比，促进仔猪的生长。