水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用

摘要

伊氏锥虫隶属于原生动物门，鞭毛虫纲，动基体目，锥虫科，锥虫属。能引起动物的急性死亡或隐性感染，造成贫血、进行性消瘦、死胎、流产、泌乳减少等[1]，对畜牧业特别是水牛养殖业造成很大的损失[2]。
　　 目前用于伊氏锥虫的免疫学诊断方法有ELISA、间接免疫荧光抗体试验和间接血凝试验等，但这些技术检测时间长或需要特殊仪器设备等，不适合在基层推广应用。免疫胶体金技术开始于20世纪80年代，在人类疾病的诊断中已得到广泛应用，该法具有操作简便，出结果快，灵敏特异，检测受外界因素影响较小，安全简便，不需任何仪器和设备，成本低廉，所需试剂和样本量少等优点。适合于基层大面积普查和大批量时间紧的检测等。
　　 本研究采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体，在硝酸纤维素膜上涂加纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG二抗，作为检测带和质控带，然后优化条件，研制成检测伊氏锥虫病的免疫胶体金试纸条。通过交叉试验表明该试纸条与衣原体、弓形虫、旋毛虫、巴贝斯焦虫和大片吸虫无交叉反应。该试纸条最低可以检出1：3200倍稀释的伊氏锥虫VSG抗原(浓度为3.11mg/ml)。应用该试纸条对230份水牛血清样本进行初步检测，同时用夹心ELISA做平行实验，阳性符合率为88.2％。两者具有高度的一致性。结果证明该试纸条是一种快速、灵敏特异的水牛伊氏锥虫病的检测方法，伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制成功为水牛伊氏锥虫病的现场检测诊断和预控提供了有效的方法。