无机磷试剂辅助下氨基酸成肽反应及寡肽的分离与性质

摘要

本文以电喷雾质谱为检测手段，研究了无机磷试剂辅助下L-丝氨酸、L-苏氨酸的自组成肽反应，实验研究结果表明：1)L-丝氨酸在POCl3或PCl5辅助下，均能成肽，最长肽链为六肽，成肽产物主要是O-磷酰化多肽；2)在四氢呋喃溶液中丝氨酸、苏氨酸成肽较好，两种氨基酸的转化率较高；3)提高L-丝氨酸初始浓度可加快成肽速率；4)升高温度会加快丝氨酸或苏氨酸成肽反应速率，并能促进丝氨酸生成磷酰化多肽，但反应温度高于50℃(对于丝氨酸)或60℃(对于苏氨酸)会导致大量的副反应发生，不利于成肽反应；5)时间对L-苏氨酸成肽反应影响不大，但反应时间超过6小时(20℃下)会产生一些副产物。 实验结果发现L-丝氨酸与L-苏氨酸的成肽有差异。丝氨酸最长能达到六肽，而L-苏氨酸生成的最长肽仅为三肽，L-丝氨酸主要成肽产物为磷酰化多肽，L-苏氨酸则倾向于生成多肽，这些差异应与两种氨基酸的结构差别有关。 利用反相高效液相色谱，以乙腈和水作为流动相，对苏氨酸寡肽进行了分离纯化。研究了流动相的不同组成对分离的影响并优化了色谱条件，当以0～10min，1～5﹪乙腈/水(v/v)梯度洗脱；11min后，5﹪乙腈/水(v/v)恒定洗脱时，分离的效果最佳，能达到苏氨酸、二肽和三肽完全分离，并制备得到了苏氨酸二肽和三肽产品，其结构经电喷雾质谱、红外光谱、1HNMR和13CNMR分析进行了表征。 利用紫外光谱分析，对色氨酸二肽(Trp-Trp)与二价金属离子(Cu2+、Ca2+、Zn2+)相互作用进行了研究，发现色氨酸二肽与Cu2+作用后最大吸收波长(280nm和21gnm附近)处的吸光度都降低，同时218nm处的最大吸收波长发生红移，当色氨酸二肽与Cu2+以摩尔比为1：10混合作用后红移达到8nm，随着Cu2+的浓度增大色氨酸二肽与其的相互作用也随之增强。但提高Ca2+或Zn2+的浓度并不能明显增强与色氨酸二肽的之间的作用，而延长作用时间在某些程度上能增强Ca2+或Zn2+与色氨酸二肽的相互作用。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章前言

第二章无机磷试剂辅助下L-丝氨酸、L-苏氨酸成肽反应及其电喷雾质谱分析

第三章反相高效液相色谱分离纯化苏氨酸寡肽

第四章色氨酸二肽与金属离子的相互作用研究

结论

参考文献

致谢

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