大豆分离蛋白酶水解及肽的应用研究

摘要

本实验以大豆分离蛋白为原料，用Alcalase蛋白酶和Protamex蛋白酶进行水解，通过单因素实验和响应面实验优化了条件；利用凝胶过滤法对大豆多肽进行分离；利用Rancimat对多肽的抗氧化活性进行了分析；利用高效凝胶色谱法分析了多肽的分子量分布；研究大豆肽饮料。 Alcalase碱性蛋白酶的最佳条件为，90℃水浴加热预处理10min，大豆分离蛋白浓度5.9％，加酶量2.2％，温度61℃，酶解时间4h，pH 8.0，在此条件下，可以得到水解度为16.2％的酶解液。Protamex蛋白酶的最佳条件为，90℃水浴加热预处理10min，大豆分离蛋白浓度6.0％，加酶量2.4％，酶解温度51℃，酶解时间4h，pH7.0，在此条件下，可以得到水解度为12.94％的酶解液。然后将酶解液在沸水浴加热15min钝化蛋白酶，降至室温后用HCI溶液调节pH值到4.5，4000r/min离心15min，收集上清液，喷雾干燥，对Alcalase蛋白酶水解液进行活性炭脱色脱苦，脱色脱苦条件为：炭液比0.69/0(W/V)，温度50±2℃，慢速搅拌2h。 对Protamex蛋白酶水解制得大豆多肽进行超滤膜过滤后，得到的分子量在6000Da以下的多肽进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离。得到B1、B2和B3三个组分，含量分别约为20.12％，45.89％和33.98％。然后对B2组分再次进行分离，得到a、b、c和d四个组分，含量分别约为3.73％，21.76％，61.22％和13.29％。 分子量6000Da到10000Da的样品A的抗氧化性低于分子量6000Da以下的样品B。经过葡聚糖凝胶过滤后得到的B1、B2和B3样品中，B2的抗氧化性最好，B3次之。对B2再次进行凝胶分离得到的a、b、c和d四个组分的抗氧化性依次为a>b>d>c。 Protamex蛋白酶水解多肽得到的多肽分子量主要集中在5500～2000Da之间；Alcalase碱性蛋白酶水解分子量主要集中在1200～400Da之间；日本不二大豆多肽分子量主要集中在3000～400Da之间。抗氧化性最好的组分a和组分b的分子量分别约为630Da和310Da左右。 论文研究了大豆多肽饮料中柠檬酸、白砂糖、苹果酸和大豆多肽用量的相互影响，确定了最佳配比方案。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1概述

1.2大豆蛋白水解物的功能性质及其应用

1.3大豆多肽的国内外研究进展

1.4立题的背景和意义

1.5课题研究的主要内容

第二章大豆分离蛋白酶水解工艺的研究

2.1概述

2.1.1大豆分离蛋白酶水解方法的概述

2.1.2蛋白酶的作用机理

2.2实验材料与方法

2.2.1试验材料

2.2.2实验方法

2.3试验结果与讨论

2.3.1原料基本成分分析

2.3.2蛋白酶酶活力测定

2.3.3 Alcalase碱性蛋白酶酶解反应单因素实验

2.3.4 Alcalase碱性蛋白酶酶解响应面分析

2.3.5 Protamex蛋白酶酶解反应单因素实验

2.3.6 Protamex复合蛋白酶酶解响应面分析

2.3.7脱色与脱苦对大豆分离蛋白酶水解产物的影响

2.4小结

第三章大豆多肽的分离

3.1概述

3.2材料与方法

3.2.1实验材料

3.2.2实验方法

3.3结果与讨论

3.3.1凝胶色谱法分离大豆多肽

3.4小结

第四章大豆多肽的抗氧化活性研究

4.1引言

4.2材料与方法

4.2.1实验材料

4.2.2实验方法

4.3结果与讨论

4.4 小结

第五章大豆多肽的分子组成分析

5.1概述

5.2材料与方法

5.2.1实验材料

5.2.2实验方法：高效凝胶过滤色谱法

5.3结果与讨论

5.3.1大豆多肽的紫外扫描分析

5.3.2大豆多肽高效凝胶色谱分析

5.4小结

第六章大豆多肽饮料的研究

6.1概述

6.2材料与方法

6.2.1实验材料

6.2.2实验方法

6.3结果与讨论

6.3.1大豆多肽饮料的配比正交实验分析

6.3.2产品质量指标测定

6.4小结

第七章结论与展望

7.1结论

7.2展望

参考文献

致谢

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