构建含NURR1基因腺病毒对C17.2神经干细胞调控及其对帕金森病治疗

摘要

帕金森病(Parkinson's Disease,PD)又名震颤麻痹(Paralysis Agitans),是一种常见的中老年人神经系统变性疾病,60岁以上人群患病率为1000/10万,并随着年龄增长而增高,两性分布差异不大.1 PD的研究现状PD的病理改变主要位于黑质,无论是原发性或继发性PD,黑质几乎都必受累.PD时,黑质、纹状体内DA(dopamine,DA)含量显著减少,DA的抑制作用降低,而乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)含量相对增加,两者动态平衡遭到破坏,从而出现PD症状.因此设法补充体内丢失和保护残存的多巴胺能神经元,使其与所支配的脑区内神经元重建有效的突触联系,恢复原来多巴胺能神经支配,是治疗PD的最佳途径.2神经干细胞治疗PD的研究现状自从帕金森病的病理和生化比较明了后,许多学者就开始摸索细胞移植治疗帕金森病可能性.初期报道有效的肾上腺髓质细胞移植现已废弃.胚胎多巴胺能细胞移植因胎龄限制、胚胎来源、论理学等问题,难以为继.近年来神经干细胞(neural stem cell, NSC)的研究进展迅速.神经干细胞具有未成熟的特性、表型可塑性、免疫原性低和可复制等特性.用外源基因对体外培养的神经干细胞进行调控后,再移植到已有退行性的病变黑质内,即有可能最大程度的促使神经干细胞分化为与移植部位相适应的神经元.3基因治疗PD的研究现状国内外对PD进行的基因治疗,已取得一定效果.帕金森病患者脑合成DA所需的TH、AADC酶活性明显不足,因此提供外源性TH和AADC基因有助于增加DA合成.但单纯补充TH、ADCC等基因治疗和某些保护多巴胺能神经元的神经营养因子基因治疗不能阻滞PD进展,也没解决多巴胺能神经元减少这一根本问题.NURR 1属于核受体超家族,几乎完全表达在中枢神经系统内.基因敲除实验表明,NURR1与多巴胺能神经元发生、发展和生存关系密切.随着年龄老化,NURR1基因表达逐渐减少,黑质内TH基因表达随之下调,两者表现为随年龄增长而下降的一致性.因此构建高效表达Nurr1载体,诱导神经干细胞分化后进行体内移植是治疗PD的理想选择.然而既往构建的含有NURR1质粒载体,受操作技术、插入基因片断、外源基因表达和转染效率等限制,影响了对NURR1基因进一步研究.重组腺病毒载体,有插入外源基因片段大、转染和表达效率高、带有标记基因等优势.因此该课题组构建Ad-NURR1重组腺病毒后,观察其在体外对C17.2神经干细胞诱导分化和两者结合体内移植后对PD的治疗效果.

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分Ad-NURR1重组腺病毒的构建和鉴定

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分Ad-NURR1重组腺病毒在C17.2细胞内的表达和其保护作用

1材料和方法

2结果

3讨论

第三部分NURR1基因对神经干细胞分化的影响及其旁分泌效应

1材料和方法

2结果

3讨论

第四部分Nurrl基因结合C17..2神经干细胞移植对PD模型的治疗

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

结论和意义

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