腺病毒介导NURR1基因转柒C17.2神经干细胞移植治疗实验性局灶性脑梗死

摘要

该实验选择NURR1为目的基因,以C17.2细胞系为靶细胞,进行脑梗死体外基因治疗、神经干细胞移植治疗的实验研究.主要工作:①构建pAdeasy-NURR1重组复制缺陷性腺病毒.②观察NURR1基因转染对C17.2神经干细胞体外分化的影响.③应用C17.2和NURR1基因修饰C17.2神经干细胞立体定向移植至局灶性脑梗死模型缺血半暗带中,观察其对实验动物神经功能缺损的改善情况;观察C17.2和NURR1基因修饰C17.2神经干细胞脑内移植后与宿主脑组织的整合、存活、移行、分化的情况;观察NURR1基因转染C17.2神经干细胞后对其体内分化的影响;观察干细胞脑内移植后的能否长期存活、致瘤性等问题.第一部分pAdeasy-NURR1重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定;结论:腺病毒是将外源基因传递进脑细胞的适合载体.该部分实验成功构建pAdeasy-NURR1重组复制缺陷性腺病毒,是整个实验的关键基础工作.第二部分NURR1基因转染对C17.2神经干细胞体外分化的影响;结论:该实验所使用的C17.2神经干细胞系,传代培养能保持干细胞特性,其标记基因LacZ较稳定,未见明显丢失.转染pAdeasy-NURR1病毒后C17.2细胞能表达NURR1 mRNA.NURR1基因转染能促进C17.2神经干细胞向神经元方向分化.第三部分NURR1基因转染C17.2神经干细胞移植治疗实验性局灶性脑缺血;结论:NURR1基因修饰神经干细胞移植治疗局灶性脑梗死,能显著改善实验动物的神经功能缺损.C17.2和NURR1基因转染C17.2神经干细胞移植至局灶性脑梗死模型缺血半暗带后,其原代或子代细胞能向周围脑组织移行,并可见与宿主神经细胞形成突触联系.其中似以NURR1基因修饰C17.2神经干细胞移植组移行更为明显.NURR1基因转染C17.2神经干细胞移植至局灶性脑梗死模型缺血半暗带后,能促进神经干细胞向神经元方向分化.移植半年后移植部位未见异常细胞增生.

目录

文摘

英文文摘

引言

第一部分pAdeasy-NURR1重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定

1材料和方法

2结果

2讨论

第二部分NURR1基因转染对C17.2神经干细胞体外分化的影响

1材料和方法

2结果

3讨论

第三部分NURR基因转染C17.2神经干细胞移植治疗实验性局灶性脑缺血

1材料和方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

附录

附表

附图

英文缩写词表

致谢

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