南方地区家族性Hungtington舞蹈病与IT15基因突变相关性的研究

摘要

目的：本实验对我国南方地区家族性HD基因(IT15基因)研究的主要目的：(1)明确该地区家族性Hungtington舞蹈病IT15基因突变的特点；(2)明确临床上疑为HD患者的诊断；(3)比较HD患者和正常人CAG重复数目范围的差异；(4)探讨CAG重复次数与发病年龄、疾病严重程度及性别的关系。 方法：HD患者来自于我国南方地区4个HD家系的77例成员，其中HD患者13例，家系正常者64例。20例正常对照者来自该地区健康人群。HD的临床诊断主要依据病史、家族史和临床表现。基因组DNA均从外周血白细胞中提取，PCR方法扩增IT15基因CAG重复序列。采用2％琼脂糖凝胶电泳和8％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳判断PCR扩增产物的大小。PCR产物经纯化回收后克隆并测序，以明确目的基因的序列和重复次数。扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，根据已测序的DNA分子量及迁移率拟合方程lgY=a+blgX(X-迁移距离，Y-DNA片段大小)计算其它扩增产物的分子量大小，然后根据公式N(CAG)=(DNA长度-侧翼序列长度)/3计算CAG重复次数N。 结论:1.本研究对南方地区4个家系的13例HD患者和64例亲属及20例正常健康对照者作IT15基因动态突变检测，所有患者均检测出携带异常等位基因，表明我国南方地区家族性Huntington舞蹈病的发病为IT15基因的动态突变所致。2.通过对南方两地区HD患者基因突变检测和临床资料分析，初步明确了该地区HD患者异常等位基因CAG三核苷酸重复数目与发病年龄存在负相关性；与HD患者性别和CAG重复序列的亲代传递者性别无相关性。3.提示只有33％的HD患者发病年龄变异与CAG重复次数有关，发病年龄还受环境等因素的影响。CAG重复次数不能作为预测HD的发病年龄的独立指标。4.PCR结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的技术方法检测HD基因突变是可行的。

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