机械牵张力与oxLDL共同作用对巨噬细胞Raw264.7 MAPKs激活的影响

摘要

实验目的： 血脂异常使得血管内皮损伤，引起血中单核/巨噬细胞迁移入内皮下层、异常增殖、分泌生长因子、吞噬脂质，最后形成单核巨噬细胞源性泡沫化细胞，这在动脉粥样硬化发生发展过程中起极其关键作用。然而，临床资料显示血脂异常合并高血压时动脉粥样硬化发生发展更快，更明显，提示两者存在协同促进血管重塑作用。但如何起协同促进作用的机制仍然不清楚。本研究旨在探讨在氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）、生物机械力单独存在时对静息培养巨噬细胞Raw264.7MAPKs活性的影响，并在此基础上进一步观察oxLDL与生物机械力同时存在时对Raw264.7内MAPKs活性的影响是否发生什么变化，初步探讨高血压产生的异常机械力与异常血脂协同促进血管重塑的机制，为临床防治代谢综合症（MS）提供实验室资料。 实验方法： （1）用CO2恒温培养箱体外培养巨噬细胞株Raw264.7；使用墨汁染色方法对其进行生物学鉴定。 （2）一次性密度梯度离心法分离血浆中的LDL（native LDL，nLDL），用硫酸铜对其氧化，获得oxLDL；用琼脂糖凝胶电泳鉴定分离的nLDL和oxLDL。 （3）不同浓度的oxLDL和机械牵张力分别作用于Raw264.7，用Western blot的方法进一步检测MAPKs磷酸化水平的变化； （4）用oxLDL和机械牵张力共同作用于Raw264.7，Western blot的方法检测MAPKs磷酸化水平的变化。 结果： （1）光镜下Raw264.7细胞完全贴壁，界限清楚，呈圆形、椭圆形、扁梭形及不规则行，胞核呈圆形或卵圆形，位于细胞中央或略偏，胞质内可有空泡状结构存在，细胞分裂增殖，可出现短细或钝圆的突起；墨汁染色后胞内有墨汁斑块或墨汁颗粒存在，或者有淡染呈云雾状的黑色存在。 （2）一次性密度梯度离心后，在密度液中间隔出现极低密度脂蛋白（vLDL）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）和无脂血浆蛋白条带，分界清晰；琼脂糖凝胶电泳显示LDL和oxLDL泳道在血浆β脂蛋白处出现单一的条带，并且oxLDL的迁移率明显较LDL的高。 （3） oxLDL和机械牵张力可以分别引起Raw264.7 ERK1/2、JNK1/2、p38磷酸化水平的增加，呈时间及浓度依赖性。 （4）机械牵张力与oxLDL共同作用时，Raw264.7中ERK1/2、JNK1/2磷酸化水平明显增强，p38磷酸化水平增强不明显。 结论： （1）在本实验室培养条件下的Raw264.7具有典型的巨噬细胞形态特点和吞噬功能，可以用于后续实验研究。 （2）本实验室自行制备的oxLDL氧化程度及纯度均较高，可以满足后续实验所需。 （3） oxLDL和机械牵张力可分别增加Raw264.7 ERK1/2、JNK1/2、p38的磷酸化水平；并且机械牵张力与oxLDL共存时，两者对Raw264.7 MAPKs的激活起协同促进作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

一、正常血管的结构和功能

二、动脉粥样硬化及其形成的相关机制研究

三、高血压、血脂异常与血管重塑

四、MAPKs活化与血管重塑

五、本文研究的目的与意义

第一章巨噬细胞Raw264.7的培养与鉴定

1.1材料

1.2实验方法

1.3实验结果

1.4讨论

第二章oxLDL的提取、纯化与鉴定

2.1材料

2.2实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

第三章oxLDL对巨噬细胞Raw264.7 MAPKs的影响

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第四章机械牵张力对巨噬细胞Raw264.7 MAPKs的影响

4.1材料

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

第五章机械牵张力与oxLDL共同作用对巨噬细胞Raw264.7 MAPKs的影响

5.1材料

5.2方法

5.3结果

5.4讨论

结语

参考文献

附图

致谢